(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221021482 2.4 (22)申请日 2022.03.07 (71)申请人 武汉大学 地址 430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山 武汉大学 (72)发明人 郭明雄　孙桂鸿　李闯　 (74)专利代理 机构 武汉科皓知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 42222 专利代理师 江慧 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 YRNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌 诊断试剂中的应用及抗肺癌药物 (57)摘要 本发明提供了YRNA片段hY4F作为分子标志 物在制备肺癌诊断试剂中的应用即抗肺癌药物， 本发明经试验发现： 肺癌患者血浆中的hY4F表达 水平显著高于健康对照组， 肺癌患者的肺癌细胞 的细胞外囊 泡EVs中的hY4F表 达水平显著高于健 康对照组， 因此， YRNA片段hY4F可作为分子标志 物用于区分肺癌患者和健康者， 灵敏度达到 78％； 特异度达到69％。 本发明还发现， 肺癌 细胞 能够通过EVs将hY4F传递给其他肺癌细胞， 发挥 抑癌功能， YBX 1基因敲除的肺癌细胞在裸鼠体内 的肿瘤形成和转移能力显著减弱； 因此提高YRNA 片段hY4F在肺癌细胞中表达和/或抑制RNA结合 蛋白在肺癌细胞中表达的药物或小分子抑制剂 有作为抗肺癌药物的潜能。 权利要求书1页 说明书12页 序列表2页 附图7页 CN 114807364 A 2022.07.29 CN 114807364 A 1.YRNA片段h Y4F作为分子标志 物在制备肺癌诊断试剂中的应用。 2.根据权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 所述YRNA片段hY4F作为分子标志物用于区 分肺癌患者和健康者， 其中肺癌患者血浆中的hY4F表达水平显著高于健康对照组， 肺癌患 者的肺癌细胞的细胞外囊泡EVs中的h Y4F表达水平显著高于健康对照组。 3.根据权利 要求1所述的应用， 其特征在于， 所述肺癌诊断试剂包括YRNA片段hY4F的检 测试剂或检测试剂盒。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述检测试剂盒包括引物， 所述引物的序 列如SEQ ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所示。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述检测试剂 盒还包括： 阳性对照模板、 阴 性对照模板和qPCR反应常规试剂。 6.一种抗肺癌药物， 其特 征在于， 所述 抗肺癌药物包括： 提高YRNA片段h Y4F在肺癌细胞中表达的药物； 和/或抑制RNA结合蛋白YBX1表达的药物或小分子抑制剂。 7.根据权利要求6所述的一种抗肺癌药物， 其特征在于， 所述抑制RNA结合蛋白YBX1表 达的药物或小分子抑制剂 包括： YBX1的小干扰RNA和/或敲除YBX1的sgRNA； 所述YBX1的小干 扰RNA的正义链的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示， 反义链的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所 示； 所述sgRNA的正反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.8‑SEQ ID NO.9所示。 8.根据权利 要求6所述的一种抗肺癌药物， 其特征在于， 所述提 高YRNA片段hY4F在肺癌 细胞中表达的药物包括： h Y4F模拟物， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807364 A 2YRNA片段hY4F作 为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用 及抗肺癌药物 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学检测技术领域， 特别涉及Y RNA片段hY4F作为分子标志物在制 备肺癌诊断试剂中的应用及抗肺癌药物。 背景技术 [0002]肺癌是一种严重威胁人类健康的重大疾病， 其发病率和死亡率都很高， 在全世界 范围内的肿瘤相关死亡病例中居于首位。 无论是从发病率和死亡率来看， 肺癌 都是中国的 第一大癌症， 在各种肿瘤 疾病中居于首位， 严重威胁着我国人民的生命健康。 依据 2015年的 统计数据， 我国有733,300例新增肺癌病例和610,200例肺癌死亡病例。 近年来的统计数据 表明， 肺癌病人的5年生存率仅有18％， 超过一半的确诊肺癌病人都是在肺癌中晚期， 其5年 生存率低于5％。 由于目前对于肺癌还缺乏有效的早期诊断方法， 因此多 数肺癌病人被确诊 时已经处于中晚期， 难以得到有效的治疗。 因此， 关于肺癌早期诊断和预测方法的研究迫在 眉睫。 [0003]细胞外囊泡(Extr acellular  Vesicles， EVs)是细胞分泌到胞外的一种囊泡状结 构， 其参与肿瘤微环境中肿瘤细胞和正常细胞之间的细胞通信， 从而参与肿瘤的发生和转 移。 由于胞外囊泡可以通过血液、 淋巴和其他体液系统参与体内的运输和信号传递， 并且其 中包含的核酸等物质可以借 由囊泡的保护而免遭降解。 由于胞外囊泡的这些特性， 使得其 在肿瘤非侵入式检测中具有巨大 的潜力。 目前已有大量报道表明， 外泌体等胞外囊泡中的 蛋白以及核酸成分可能作为癌症早期诊断的标志 物。 [0004]非编码小RNA是长度在200nt以下的不能编码蛋白质的一类RNA， 其中包括miRNA、 snRNA、 snoRNA、 tRNA、 piRNA、 rRNA和YRNA等多种RNA类型。 这些小RNA在多种生理病理过程中 发挥作用， 例如RNA沉默、 转录调控、 染色体DNA复制、 RNA加工、 调节蛋白运输和降解等。 越来 越多的研究表明， 非编码小RNA可以被细胞分选到外泌体中， 免受RNA酶的降解， 然后随着 外 泌体被受体细胞通过胞吞或者细胞融合等方式摄取后， 进入受体细胞发挥调控功能。 因此， 研究肺癌胞外囊泡非编码小RNA对于探索肺癌早期诊断和预测的靶标， 以及肺癌 发生和发 展的机制具有重要意 义。 [0005]因此， 有必要开发一种新的灵敏度、 特异度高的标志 物及抗肺癌药物。 发明内容 [0006]本发明目的是提供Y RNA片段hY4F作为分子标志物在制备肺癌诊断试剂中的应用， 所述YRNA片段hY4F作为分子标志物用于区分肺癌患者和健康者， 其中肺癌患者血浆中的 hY4F表达水平显著高于健康对照组， 肺癌患者的肺癌细胞的细胞外囊泡EVs中的hY4F表达 水平显著高于健康对照组， 单独检测 YRNA片段hY4F区分肝癌患者和癌旁对照者， 灵敏度达 到78％； 特异度达到69％。 且YBX1基因敲除的肺癌细胞在裸鼠体内的肿 瘤形成和转移能力 显著减弱， 说明抑制RNA结合蛋白YBX1表达的药物或小分子抑制剂有作为抗肺癌药物的潜说　明　书 1/12 页 3 CN 114807364 A 3