(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210217062.2 (22)申请日 2022.03.07 (71)申请人 河南省肿瘤医院 地址 450004 河南省郑州市金 水区东明路 127号 (72)发明人 尹青松　梁桃桃　汪小姣　艾昊　 王倩　 (74)专利代理 机构 西安合创非凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 61248 专利代理师 杨蕾 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 TCF1-IRF4在制备预测CLL疾病预后试剂盒 中的应用 (57)摘要 本发明公开了TCF1 ‑IRF4在制备预测CLL预 后试剂盒中的应用， ①当TCF1的表达水平＜0.6 7 且IRF4的表达水平≥1.99时， CLL患者疾病进展 快、 临床预后差的可能性较大； ②当TCF1的表达 水平＜0.67或IRF4 的表达水平≥1.99时， CLL患 者疾病进展快、 临床预后差的可能性相对较大； ③当TCF1的表达水平≥0.67且IRF4的表达水平 ＜1.99时， CLL患者疾病稳定、 临床预后好的可能 性较大。 本发 明为深入了解机体免疫功能状态在 CLL进展中的作用提供更多的临床研究资料， 在 预测CLL患者疾病进展快慢和预后以及评估小分 子靶向药物、 免疫调节治疗策略等的疗效方面具 有广阔的应用前 景。 权利要求书2页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114507736 A 2022.05.17 CN 114507736 A 1.TCF1‑IRF4在制备 预测CLL疾病预后试剂盒中的应用， 其特 征在于： ①当TCF1的表达水平＜0.67且IRF4的表达水平≥1.99时， CLL患者疾病进展快、 临床预 后差的可能性较大； ②当TCF1的表达水平＜0.67或IRF4的表达水平≥1.99时， CLL患者疾病进展快、 临床预 后差的可能性相对较大； ③当TCF1的表达水平≥0.67且IRF4的表达水平＜1.99时， CLL患者疾病稳定、 临床预后 好的可能性较大。 2.如权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述预测CLL疾病预后试剂盒中， 包括用于扩 增TCF1 cDNA的引物和用于扩增IRF4  cDNA的引物， 其中， 用于扩增TCF1  cDNA的引物如下： TCF7 (F): 5'  ‑  TCCACCACAGGAGGAAAAAGA  ‑  3'； TCF7 (R): 5'  ‑  CGCAGGGCTAGTAAGCAGTT  ‑  3'； 用于扩增IRF4  cDNA的引物如下： IRF4 (F): 5'  ‑  CGAGAAGGCATCGACA AGCC  ‑  3'； IRF4 (R): 5'  ‑  ATGGACATCTGCG GGTCCTC  ‑  3'。 3.如权利要求2所述的应用， 其特 征在于： 所述预测CL L疾病预后试剂盒中， 还 包括： 用于扩增内参的引物， 具体如下: GAPDH (F): 5'  ‑  GAAGGTGAAGGTCGGAGTCAA‑  3'； GAPDH (R): 5'  ‑  GACAAGCTTCCCGTTCTCAG  ‑  3'。 4.如权利要求2所述的应用， 其特 征在于： 所述预测CL L疾病预后试剂盒中， 还 包括： 用于分离外周血单个核细胞的试剂、 用于总RNA提取的试剂、 用于逆转录PCR的试剂、 用 于实时定量PCR的试剂中的任意 一种或至少两种。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于： 所述的用于分离骨髓单个核细胞的试剂为淋 巴细胞分离液 （Fico ll） 。 6.如权利要求 4所述的应用， 其特 征在于： 所述的用于总RNA提取的试剂为TRIZOL。 7.如权利要求2 ‑6任一项所述的应用， 其特征在于， 所述预测CLL疾病预后试剂盒可用 于非诊断检测TCF1 ‑IRF4表达 。 8.如权利要求7 所述的应用， 其特 征在于： 包括如下步骤： S1、 取待测骨髓 样本， 分离得到单个核细胞； S2、 在步骤S1得到的单个核细胞中加入总RNA提取的试剂， 混匀； S3、 加入氯仿， 混匀后进行离心； S4、 吸取上层液体， 加入异丙醇后离心去上清； S5、 乙醇洗涤， 干燥， 得到RNA样品； S6、 将步骤S5得到的RNA样品逆转录成cDNA； S7、 将步骤S5得到的cDNA， 利用所述的试剂盒进行目的基因表达量检测。 9.如权利要求8所述的应用， 其特 征在于： 所述的单个核细 胞、 总RNA提取的试剂、 氯仿的配比按5～10 ×106个细胞： 1毫升： 0.1～ 0.3毫升计算； 所述的总RNA提取的试剂为TRIZOL；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114507736 A 2步骤S3中， 所述的离心的条件为： 温度2 ～8℃、 转速10 000～15000g、 时间15～3 0分钟； 步骤S4中， 所述的异丙醇的用量按上层 液体： 异丙醇=体积比1～2:1～2计算； 离心的条 件为： 温度2 ～8℃、 转速10 000～15000g、 时间10～ 20分钟； 步骤S5中， 所述的乙醇洗涤的次数两次， 第一次用75%乙醇在 ‑20℃条件下洗涤， 第二次 用100%乙醇在 ‑20℃条件下洗涤， 每次均匀混合30s后， 2～8℃， 8000～12000g离心5～10分 钟； 干燥为真空离心机 干燥； 条件为温度2 ～8℃、 时间5～10分钟； 步骤S6中， 所述的逆转录通过用于逆转录PCR的试剂实现； 步骤S7中， 所述的目的基因表达量检测通过用于实时定量PCR的试剂实现。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114507736 A 3