(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210242614.5 (22)申请日 2022.03.11 (71)申请人 安徽医科 大学 地址 230000 安徽省合肥市蜀山区梅 山路 81号 (72)发明人 黄艳　赵大海　李洋洋　吴强　 谈媛媛　孟晓明　王媛媛　金娟　 徐振山　李峰　张安琪　 (74)专利代理 机构 合肥市浩智运专利代理事务 所(普通合伙) 34124 专利代理师 缪璐欢 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A61K 31/7088(2006.01) A61P 11/00(2006.01) (54)发明名称 一种新circRNA、 试剂盒及用途 (57)摘要 本发明提供一种新circRNA， 涉及疾病检测 技术领域， 具体涉及circRNA在制备治疗急性肺 损伤制剂中的应用， 是基于目前对急性肺损伤的 提前诊断缺乏有效方法的问题提出的。 circRNA 对应的DNA序列如SEQ  ID NO.1所示。 本发明采用 3RT‑PCR法验证对照组和模型组中circRNA相对 表达量， 结果显表明circRNA在缺氧缺血模型组 中表达量明显高于正常对照组， 差异具有统计学 意义(P<0.001)， 是正常组的约1.8倍， 在缺氧缺 血的20例脑组织中70％表达趋势符合预期， RT ‑ PCR验证实验结果与数据分析结果基本一致， 显 示circRNA是很好的辅助诊断分子标志物， 其与 急性肺损伤具有很好的相关性， 具有非常重要的 研究价值和临床应用价 值。 权利要求书1页 说明书21页 序列表10页 附图3页 CN 114634932 A 2022.06.17 CN 114634932 A 1.一种新circRNA， 其特 征在于： 所述circRNA对应的DNA序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.一种检测急性肺损伤的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒检测样品中 circRNA的表达水平， circRNA对应的DNA序列为SEQ  ID NO.1。 3.根据权利要求2所述的一种检测急性肺损伤 的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于： 所 述试剂盒采用测序技 术、 核酸杂交技 术或核酸扩增技 术检测样品中circRNA的表达水平。 4.根据权利要求2所述的一种检测急性肺损伤 的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于： 所 述试剂盒采用二代测序技术、 三代测序技术、 探针杂交技术、 基因芯片技术或荧光定量PCR 技术检测样品中circRNA的表达水平。 5.根据权利要求2所述的一种检测急性肺损伤 的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于： 所 述试剂盒含有与circRNA杂交的探针或扩增circRNA的特异性引物， 特异 性引物包括上游引 物和下游引物。 6.根据权利要求5所述的一种检测急性肺损伤 的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于： 所 述试剂盒采用特异的引物检测样品中circRNA的表达水平。 7.根据权利要求6所述的一种检测急性肺损伤 的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于： 所 述上游引物的序列如SEQ  ID NO.2所示， 下游引物的序列如SEQ  ID NO.3所示。 8.根据权利要求7所述的一种检测急性肺损伤 的荧光定量PCR试剂盒， 其特征在于： 所 述样品包括肺组织或外周血。 9.权利要求1所述的circRNA在制备治疗急性肺损伤制剂中的应用。 10.权利要求2 ‑8任一项所述的试剂盒在制备急性肺损伤诊断制剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114634932 A 2一种新circRNA、 试剂盒及用途 技术领域 [0001]本发明涉及疾病检测技 术领域， 更 具体地说， 涉及一种新circRNA、 试剂盒及用途。 背景技术 [0002]急性肺损伤(Acute  lung injury， ALI)是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上 皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤， 造成弥漫性肺间质及肺泡水肿， 导致的急性低氧性呼吸 功能不全。 以肺容积减少、 肺顺应性降低、 通气 /血流比例失调为病理生理特征。 其显示 非特 异性症状， 但气短是主症状， 时而伴随咳或胸痛。 急性肺损伤患者 典型地在从最初的伤害或 疾病起24‑48h以内显现出上述症状， 重度的情况下会致死。 死亡率为极高的30 ‑40％， 可因 老龄或并存 疾病而进一步提高。 [0003]急性肺损伤的诊断基本上通过临床诊断来进行。 急性肺损伤的临床 所见也与急性 心力衰竭以及肺感染的临床所见类似， 为了确定诊断或者确定原因， 患者还应该进一步接 受ABG检查(Arterial  Blood Gas Test； 动脉血气检查， 测定血中的氧分压、 CO2分压、 pH等) 以及胸部X射线检查， 目前对 该病的提前诊断缺乏有效方法。 申请号为CN201310429807.2的 专利公开miR ‑155在制备防治急性肺损伤药物中的用途， 揭示miR ‑155与急性肺损伤存在密 切相关性， 其促进急性肺损伤的发生， 证明miR ‑155的下调剂可用于预防、 缓解或治疗急性 肺损伤， 特别是急性肺出 血。 [0004]环状RNA(circular  RNA， circRNA)， 一种新型的内源非编码RNA， 是近期RNA领域的 研究热点， circRNA是一类通过反向剪接将3 ’和5’末端连接起来形成 的环形RNA分子。 按照 剪接来源的不同， circRNA可分为内含子来源环状RNA以及外显子来源环状RNA。 circRNA具 有如下特征： 1)属于非编码RNA； 2)富集在细胞浆， 成环易出膜； 3)具有特异的反向剪接位 点； 4)稳定， 不易被核酸外切酶降解； 5)有一定的组织特异性， 时序特异性， 疾病特异性； 6) 表达丰度高； 7)物种保守性好； 8)可充当竞争性内源RNA(ceRNA)的角色， 进而调控靶基因的 表达。 [0005]随着对circRNA研究的深入， circRNA与疾病的相关性也越来越多的受到研究者们 的关注。 如申请号为202010450500.0的专利公开了cr icRNA在诊治胃癌中的应用， 申请号为 201910234595.X的专利公开了一种新circRNA及其在制备缺氧缺血性脑损伤诊断试剂中的 应用。 一些研 究表明， circRNA在体内含量丰富， 并且比线性RNA稳定， 呈现组织特异性表达 模式。 两个独立的实验组发现内源性circRNA可以作为microRNA(miRNA)海绵来发挥作用， 这意味着circRNA可以与miRNA结合， 从而阻断miRNA对其靶标表达的抑制作用。 这表明 circRNA在疾病的发生和发展中发挥着重要的作用， 有望成为例如癌症、 心脏病、 神经系统 疾病、 动脉硬化 等疾病的生物标志 物。 发明内容 [0006]本发明所要解决的技术问题在于解决目前对急性肺损伤的提前诊断缺乏有效方 法的问题。说　明　书 1/21 页 3 CN 114634932 A 3