(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210238245.2 (22)申请日 2022.03.11 (71)申请人 华中农业大 学 地址 430000 湖北省武汉市洪山区狮子山 街1号 (72)发明人 周扬　杨旅　韩佳政　周朗　 巫雅诗　杨利国　郭爱珍　杨文艳　 张淑君　熊家军　李翔　滑国华　 梁爱心　 (74)专利代理 机构 武汉江楚智汇知识产权代理 事务所(普通 合伙) 42228 专利代理师 彭芳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种InDel分子标记组合及其引物和在鉴定 湖北省恩施黄牛品种上的应用 (57)摘要 本发明公开了一种InDel分子标记组合及其 引物和在鉴定湖北省恩施黄牛品种上的应用， 该 分子标记组合包括4个InDel分子标记， 分别为 InDel_2位于 牛第1号染色体880122 37bp处， 其核 苷酸序列为TAAGA； InDel_4位于 牛第11号染色体 59170765bp处， 其核苷酸序列为G； InDel_8位于 牛第8号染色体29286667bp处， 其核苷酸序列为 G； InDel_14位于牛第2号染色体15978630bp处， 其核苷酸序列为AGC。 该分子标记组合可以作为 鉴定现有牛品种血统的有效靶点， 用于鉴别湖北 省恩施黄牛与国外牛品种或含有国外牛品种血 统的杂种牛， 若符合上述特征则为湖北省恩施黄 牛； 若不符合则为国外牛品种或含有国外牛品种 血统的杂种牛。 该鉴别方法为牛品种的血统来源 解析及后续的杂交改良提供必要资源和方法， 鉴 别方法简便、 准确、 有效。 权利要求书2页 说明书16页 序列表3页 附图8页 CN 115354082 A 2022.11.18 CN 115354082 A 1.一种InDel分子标记组合， 其特征在于： 所述分子标记组合包括4个InDel分子标记， 分别为InDel_2位于牛第1号染色体88012237bp处， 其核苷酸序列为TAAGA； InDel_4位于牛 第11号染色体59170765bp处， 其核苷酸序列为G； InDel_8位于牛第8号染色体29286667bp 处， 其核苷酸序列为G； I nDel_14位于牛第2号染色体159786 30bp处， 其核苷酸序列为AGC 。 2.权利要求1所述分子标记组合在鉴别湖北省恩施黄牛与国外牛品种或含有国外牛品 种血统的杂种牛上的应用， 若牛第1号染色体88012237bp处核苷酸序列为TAAGA， 第11号染 色体59170765bp处核苷酸序列为G， 第8号染色体29286667bp处核苷酸序列为G， 第2号染色 体15978630bp处核苷 酸序列为AGC， 则为湖北省恩施黄牛； 若不是则为国外牛品种或含有国 外牛品种血统的杂种牛。 3.权利要求1所述分子标记组合在牛品种纯繁、 改良和保种上的应用， 若牛第1号染色 体8801223 7bp处核苷酸序列为TAAGA， 第11号染色体59170765bp处核苷酸序列为 G， 第8号染 色体29286667bp处核苷酸序列为G， 第2号染色体15978630bp处核苷酸序列为AGC， 则为湖北 省恩施黄牛； 若不是则为国外牛品种或含有国外牛品种血统的杂种牛。 4.用于检测权利要求1所述分子标记组合的引物组， 其特 征在于： 所述InDel_2的引物组核苷酸序列为： F： 5' TTTGGTCTTATGGCCTAC 3'， 如SEQ ID No.1所示； R： 5' TGTATCAC CGAGGAAGC 3'， 如SEQ ID No.2所示； 所述InDel_4的引物组核苷酸序列为： F： 5' TACCCGAGTTGATTGTA 3'， 如SEQ ID No.3所示； R： 5' TTGGTATTAAGCCAGTT 3'， 如SEQ ID No.4所示； 所述InDel_8的引物组核苷酸序列为： F： 5' CAAGTTCTGCCAAAGG 3'， 如SEQ ID No.5所示； R： 5' GACCCTCCAGTAACATTC 3'， 如SEQ ID No.6所示； 所述InDel_14的引物组核苷酸序列为： F： 5' GGAGGGTTTCAATCAGTAT 3'， 如SEQ ID No.7所示； R： 5' GGTGTTATGGGACTTTACC 3'， 如SEQ ID No.8所示。 5.一种湖北省恩施黄牛与国外牛品种或含有国外牛品种血统的杂种牛的鉴定方法， 其 特征在于： 包括以下步骤： (1)从待鉴定牛的组织中分离提取DNA； (2)以上述DNA为模板， 用四对引物通过聚合酶链式反应PCR扩增， 四对引物分别为： 第一对： F： 5'  TTTGGTCTTATGGCCTAC 3'， 如SEQ ID No.9所示； R： 5' TGTATCAC CGAGGAAGC 3'， 如SEQ ID No.10所示； 第二对： F： 5'  TACCCGAGTTGATTGTA 3'， 如SEQ ID No.11所示； R： 5' TTGGTATTAAGCCAGTT 3'， 如SEQ ID No.12所示； 第三对： F： 5'  CAAGTTCTGCCAAAGG 3'， 如SEQ ID No.13所示； R： 5' GACCCTCCAGTAACATTC 3'， 如SEQ ID No.14所示； 第四对： F： 5'  GGAGGGTTTCAATCAGTAT 3'， 如SEQ ID No.15所示； R： 5' GGTGTTATGGGACTTTACC 3'， 如SEQ ID No.16所示；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115354082 A 2(3)将上述PCR产物进行测序， 根据测序结果比对， 若第1号染色体88012237bp处核苷酸 序列为TAAGA， 第11号染色体59170765bp处核苷酸序列为G， 第8号染色体29286667bp处核苷 酸序列为G， 第2号染色体15978630bp处核苷酸序列为AGC， 则为湖北省恩施黄牛； 若不是则 为国外牛品种或含有国外牛品种血统的杂种牛。 6.根据权利要求5所述 鉴定方法， 其特 征在于： PCR扩增反应程序为： InDel_4： 94℃预变性3min， 94℃变性30s， 50℃退火30s， 72℃延伸1min， 32个循环， 72℃ 延伸5min； InDel_2、 InDel_8、 InDel_14： 94℃预变性3min， 94℃变性30s， 57℃退火30s， 72℃延伸 1min， 32个循环， 72℃延伸5mi n。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115354082 A 3