(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210237393.2 (22)申请日 2022.03.11 (71)申请人 中国计量大 学 地址 310018 浙江省杭州市江干区下沙高 教园区学源街258号 (72)发明人 叶子弘　夏文强　李士玉　汤近天　 崔海峰　张雅芬　 (74)专利代理 机构 杭州天勤知识产权代理有限 公司 33224 专利代理师 沈金龙 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于 茭白植物 幼苗选育的方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于茭白植物幼苗选育 的方法。 所述方法为： 提取含有菰黑粉菌的待检 测样品的DNA作为扩增模板； 使用荧光定量PCR方 法进行检测， 检测使用的引物对包括核苷酸序列 如SEQ ID No.1所示的正向引物和核苷酸序列如 SEQ ID No.2所示的反向引物； MT型菰黑粉菌和T 型菰黑粉菌检测使用的探针的核苷酸序列如SEQ   ID No.3和SEQ  IDNo.4所示； 根据T型菰黑粉菌含 量/MT型菰黑粉菌含量的比值预测茭白植物成熟 期的表型， 进行茭 白植物幼苗的选育。 通过分析 茭白植物茎节或茎尖组织中T型与MT型菰黑粉菌 的含量， 可以有效预测其未来是否会 形成灰茭或 雄茭， 从而 优化茭白育苗过程， 减少经济损失。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图5页 CN 114438258 A 2022.05.06 CN 114438258 A 1.一种用于茭白植物幼苗选育的引物对， 其特征在于， 所述引物对包括正向引物和反 向引物， 正向引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示， 反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID  No.2所示。 2.一种用于茭白植物幼苗选育的探针， 其特征在于， 所述探针包括核苷酸序列如SEQ   ID No.3所示的检测MT型菰黑粉菌使用的探针和核苷酸序列如SEQ  ID No.4所示的检测T型 菰黑粉菌使用的探针。 3.一种用于茭白植物幼苗选育的试剂 盒， 其特征在于， 包括如权利要求1所述的引物对 和权利要求2所述的探针。 4.一种用于 茭白植物 幼苗选育的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)提取含有菰黑粉菌的待检测样品的DNA作为扩增模板； (2)使用荧光定量PCR方法进行检测， 检测使用的引物对包括正向引物和反向引物， 正 向引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示， 反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.2所示； MT 型菰黑粉菌检测使用的探针的核苷酸序列如S EQ ID No.3所示， T 型菰黑粉菌检测使用的探 针的核苷酸序列如SEQ  ID No.4所示； (3)根据MT型菰黑粉菌和T型菰黑粉菌含量检测结果， 根据T型菰黑粉菌含量/MT型菰黑 粉菌含量的比值预测茭白植物成熟期的表型； (4)根据步骤(3)中预测的茭白植物成熟期的表型进行茭白植物 幼苗的选 育。 5.如权利要求4所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中待检测 样品为植物茎节， 待检测 样 品取自幼苗萌发后的第7 ‑14天。 6.如权利要 求5所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)和步骤(4)中， 选育Log2(T型菰黑粉菌 含量/MT型菰黑粉菌含量)等于或小于 ‑3.77， 且Log2(T型菰黑粉菌含量)不低于1.51， Log2 (MT型菰黑粉菌含量)不低于1.37的茭白植物为幼苗。 7.如权利要求4所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中待检测 样品为植物茎尖， 待检测 样 品取自幼苗萌发后的第7 ‑14天。 8.如权利要 求7所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)和步骤(4)中， 选育Log2(T型菰黑粉菌 含量/MT型菰黑粉菌含量)等于或小于 ‑0.78， 且Log2(T型菰黑粉菌含量)不低于0.14， Log2 (MT型菰黑粉菌含量)不低于 0.25的茭白植物为幼苗。 9.如权利要求 4所述的方法， 其特 征在于， 步骤(4)中使用中上部的薹管进行育苗。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114438258 A 2一种用于茭白植物幼苗选育的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物技 术领域， 具体涉及一种用于 茭白植物 幼苗选育的方法。 背景技术 [0002]茭白作为一种水生蔬菜在中国已有2000多年历史， 种植广泛， 尤以江浙地区种植 面积最大， 是我国仅次于莲藕的第二大水生蔬菜。 菰黑粉菌侵染是诱导植物茎部膨大形成 可食用肉质茎的关键因素。 茭白在田间生产中存在正常茭、 灰茭和雄茭三种表型。 人们日常 所食用的是植物白色的肉质茎， 即正常茭白； 灰茭的肉质茎中菰黑粉菌形成大量的黑色冬 孢子， 会引起过敏性肺炎， 不宜食用； 雄茭中不含菰黑粉菌， 茎部无法膨大形成可食用肉质 茎， 且可以抽穗开花。 在田间种植过程中， 灰茭和雄茭都需要及时清除， 否则不仅不具有经 济价值， 还会影响正常茭的种植和品质。 [0003]前期研究表明， 灰茭和正常茭 的形成是由不 同类型的菰黑粉菌侵染导致的。 菰黑 粉菌分为T型和MT型两类， T型菰黑粉菌侵染植物后， 植物结灰茭； MT型菰黑粉菌侵染植物 后， 植物结正常茭(Yang,HC.Formation  and Histopathology  of Galls Induced by  Ustilago  esculenta  in Zizania latifolia.Phytopathology.1978,68(11).Zhang  YF, Cao QC,Hu P,et al.Investigation  on the differentiation  of two Ustilago   esculenta  strains‑implications  of a relationship  with the host phenotypes   appearing  in the fields.BMC  Microbiol,2 017,17(1):228.)。 张雅芬等人利用单倍体分 离技术从植物中分离得到 菰黑粉菌后进 行观察， 实验表明T 型和MT型菰黑粉菌 之间在碳源、 氮源利用、 生长速率等各个方面均存在较大差异； 并且MT 型菰黑粉菌存在一定的发育缺陷， MT型菰黑粉菌在人工接种的条件下无法顺利侵染植物组织(Zhang  YF,Cao QC,Hu P,et  al.Investigation  on the differentiation  of two Ustilago  esculenta  strains‑ implications  of a relationship  with the host phenotypes  appearing  in the  fields.BMC  Microbiol,2017,17(1):228.You  W,Liu Q,Zou K,et al.Morphological  and  molecular  differences  in two strains of Ustilago  esculenta.Curr  Microbiol, 2011,62(1):4 4‑54.)。 [0004]传统的茭白种植及育苗以经验为主。 例如， 部分种植户不对茭白苗进行筛选和处 理， 导致田间灰茭和雄茭的比例逐年升高， 严重影响经济效益。 目前， 茭白种植过程中减少 灰茭比例的方式主要包括两种： 首先， 每年收获时若发现灰茭和雄茭的茭白植物， 则立即将 该植物铲除， 减少其向周围扩散的风险； 其次， 通过每年的育苗， 选择后代灰茭比例较低的 育苗方法进行育苗， 目前的育苗方法包括茭墩育苗和薹管育苗 等。 [0005]然而， 无论是茭墩育苗还是薹管育苗， 育苗过程都缺乏可靠的理论指导， 不同种植 地以及不同农户多根据经验进 行选育， 根据具体操作的不同， 田间的灰茭比例也各不相同。 其主要原因是育苗过程缺少相关依据， 幼苗选育的效果好坏往往需要等到几个月后茭白结 茭收获时才能知道。 整个过程反馈时间过长， 不利于茭白育苗时决策的制定， 并且前一批育 苗的好坏将会影响接下来的茭白植物育苗。 因此亟需一种可以在茭白植物育苗早期即可预说　明　书 1/9 页 3 CN 114438258 A 3