(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210238606.3 (22)申请日 2022.03.11 (71)申请人 广东岭南职业 技术学院 地址 510000 广东省广州市天河东圃大观 中路492号 (72)发明人 徐晓可　黄启红　邓华明　余至兴　 黄逸仪　徐紫薇　 (74)专利代理 机构 广州润禾知识产权代理事务 所(普通合伙) 44446 专利代理师 郑永泉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定川贝母的LAMP引物组、 试剂盒及其 检测方法与用途 (57)摘要 本发明公开了一种用于川贝母产品鉴定的 LAMP引物组、 试剂盒及其检测方法与用途， 采用 LAMP引物组完成川贝母的鉴定， 能够通过LA MP引 物组特异性扩增待鉴定川贝母样品， 通过反应体 系的显色反应观察扩增结果， 实现对川贝母正伪 品的鉴别， 本发明建立的LAMP技术应用于市售川 贝母样品快速筛查检测， 结果与中国药典PCR ‑ RFLP方法结果一致， 简便快捷， 具有较好的推广 应用前景。 权利要求书2页 说明书8页 附图2页 CN 114480719 A 2022.05.13 CN 114480719 A 1.一种鉴定川贝母的引物组， 其特征在于： 包括外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引 物BIP； 序列分别为 F3： 5’ ‑CGGATGACAC CGTGTCGG‑3’； B3： 5’ ‑CGAGATATC CGTTGCCGAG‑3’； FIP： 5’ ‑CCGCAAATCGTGCCCGGAGCACTATGC CCGCCCTACC‑3’； BIP： 5’ ‑CGGCCTGCGCCAAGGAACAGGATAGAGAGCGA ACGCCG‑3’。 2.一种鉴定川贝母的试剂盒， 其特 征在于， 含有如权利要求1所述的引物组。 3.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 含有如权利要求1所述的引物 组， 通过25 μL的LAMP反应 体系检测， LAMP反应 体系包括： 4.一种鉴定川贝母的LAMP检测方法， 其特 征在于， 包括 步骤： A1、 提取鉴别待鉴定样品DNA； A2、 设计扩增川贝母DNA的LAMP引物； A3、 基于A1 获取的待鉴定样品DNA、 A 2获取的LAMP引物配置相应的LAMP反应 体系； A4、 加入用于判断待鉴定样品DNA是否成功扩增的显色材料至LAMP 反应体系中， 通过反 应体系显色状态以确认待鉴定样品DNA是否为川贝母。 5.根据权利要求4所述的一种鉴定川贝母的LAMP检测方法， 其特征在于， 步骤A2中的 LAMP引物包括外引物F3、 外引物B3、 内引物FIP、 内引物BIP； 其序列为： F3： 5’ ‑CGGATGACAC CGTGTCGG‑3’； B3： 5’ ‑CGAGATATC CGTTGCCGAG‑3’； FIP： 5’ ‑CCGCAAATCGTGCCCGGAGCACTATGC CCGCCCTACC‑3’； BIP： 5’ ‑CGGCCTGCGCCAAGGAACAGGATAGAGAGCGA ACGCCG‑3’。 6.根据权利要求5所述的一种鉴定川贝母的LAMP检测方法， 其特征在于， 通过25μL的 LAMP反应 体系检测， LAMP反应 体系包括：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114480719 A 27.根据权利 要求4所述的一种鉴定川贝母的LAMP检测方法， 其特征在于， 步骤A4具体包 括步骤： A41、 配置LAMP反应 体系及显色材 料于反应容器中； A42、 温度为6 3℃条件下 水浴1h； A43、 依据反应 体系显色状态判断LAMP扩增结果并鉴定 。 8.一种鉴定川贝母的LAMP引物组的制备 方法， 其特 征在于， 包括 步骤： B1、 根据川贝母序列设计待验证LAMP引物组； B2、 提取川贝母DNA及混伪品DNA； B3、 基于获取的待验证LAMP引 物组、 获取的川贝母DNA及混伪品DNA建立相应的川贝母 LAMP反应 体系、 混伪品LAMP反应 体系； B4、 加入用于判断川贝母DNA是否成功扩增的显色材料至各LAMP 反应体系中， 通过各反 应体系显色状态以确定待验证LAMP引物组是否针对川贝母DNA特异性扩增； 若显色结果表明待验证LAMP引物组针对川贝母DNA特异性扩增， 则确定该引物组为有 效鉴定川贝母的LAMP引物组， 即获得鉴定川贝母的LAMP引物组； 若显色结果表明待验证LAMP引物组非特异性扩增川贝母DNA， 则依据川贝母和混伪品 的ITS序列差异进行引物组序列的改进， 改进后返回步骤B3继续验证， 直至验证通过。 9.根据权利 要求8所述的一种鉴定川贝母的LAMP引物的制备方法， 其特征在于， 步骤B4 中引物组序列的改进包括： 在FIP引物序列的3 ’端添加错 位碱基。 10.权利要求1所述引物组或权利要求2～3任一项所述的试剂盒在制备鉴定川贝母的 产品中的用途。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114480719 A 3