(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210248443.7 (22)申请日 2022.03.14 (71)申请人 湖南省作物研究所 地址 410000 湖南省长 沙市芙蓉区马坡岭 农科院内 (72)发明人 李宝　李莓　王同华　郭一鸣　 刘新红　曲亮　易丽媛　 (74)专利代理 机构 长沙七源专利代理事务所 (普通合伙) 43214 专利代理师 周晓艳　张勇 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种油菜芥酸含量基因BnaA.FA E1特异KASP 标记方法及应用 (57)摘要 本发明提供一种KASP分子标记引物， 具有快 速、 特异性强、 灵敏度高的显著优点， 可应用于筛 选、 鉴定或培育低芥酸油菜品种。 本发明基于SNP 技术开发出一种BnaA.FA E1紧密连锁KASP分子标 记设计方法， 实现快速、 准确地检测油菜芥酸基 因， 同时开发的KASP标记可实现目标位点的高 效、 低成本和高通量鉴定， 简化低芥酸甘蓝型油 菜品种育种过程。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图1页 CN 114457189 A 2022.05.10 CN 114457189 A 1.一种KASP分子标记引物， 其特征在于， 该KASP分子标记引物包括正向引物A、 正向引 物B以及通用反向引物， 具体如下： 正向引物 A： 5'‑gaaggtgaccaagttcatgctg ggacttttgggtaaatagctttggact‑3'； 正向引物B： 5'‑gaaggtcggagtcaacggattggacttttgggtaaatagctttggaca‑3'； 通用反向引物： 5'‑aacagagtggagacgtgccctacaag‑3'。 2.一种油菜芥酸含量基因BnaA.FAE1特异KASP标记方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 提取待测作物基因组DNA； 将待测样品通过SNP芯片进行基因分型； 筛选BnaA.FAE1基因特异 SNP标记； 将特异SNP标记转 化为KASP分子标记引物。 3.一种用于检测BnaA.FAE1基因的检测试剂盒， 其特征在于， 含有如权利要求1所述 KASP分子标记引物。 4.一种对油菜BnaA.FAE1基因的检测方法， 其特征在于， 使用如权利要求1所述KASP分 子标记引物或权利要求3所述检测试剂盒进行检测。 5.根据权利要求4所述的检测方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 结合所述KASP分子标 记引物将BnaA.FAE1基因进行 KASP反应； 进行SNP信号检测。 6.根据权利要求5所述的检测方法， 其特征在于， 进行SNP信号检测的具体步骤包括： 若 样品PCR产物只检测到引物PrimerX对应荧光信号， 则检测位点为X型等位基因型； 若只检测 到引物PrimerY对应荧光信号， 则检测位点为Y型等位基因型； 若同时检测 到两种荧光信号 则检测位 点， 判断待测样本为杂合基因型。 7.一种低芥酸油菜 品种选育的方法， 其特征在于， 使用如权利要求1所述KASP分子标记 引物或权利要求3所述检测试剂盒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114457189 A 2一种油菜芥酸含量基因 BnaA.FAE1特异KASP标记方 法及应用 技术领域 [0001]本发明涉及油菜选育技术领域， 具体涉及一种油菜芥酸含量基因BnaA.FAE1特异 KASP标记方法及应用。 背景技术 [0002]菜籽油的品质主要决定于其脂肪酸的组成， 主要的脂肪酸包括棕榈酸(C 16:0)、 硬 脂酸(C18:0)、 油酸(C18:1)、 亚油酸(C18:2)、 亚麻酸(C18:3)、 花生酸(C20:0)、 二十碳烯酸 (C20:1)和芥酸(C22:1)等。 其中芥酸影响菜籽油消化吸收率以及人体健康， 是油菜改良的 主要对象。 在甘蓝型油菜中， 已报道了多个芥酸含量相关基因， 其中BnaA.FAE1基因位于A08 染色体， 是油酸(C18:1)延伸至芥酸(C22:1)的关键基因， 该基因与白菜A08染色体的FAE1高 度同源(Rahman 等， 2008)。 [0003]由于驯化历史短， 甘蓝型油菜遗传资源匮乏， 使得甘蓝型油菜的遗传改良受限。 通 过甘白种间杂交， 可在甘蓝型油菜中转入白菜型油菜有利性状， 如抗病、 早熟等， 可拓宽甘 蓝型油菜遗传基础。 然而， 由于连锁累赘的存在， 在导入白菜优异性状的同时， 也会携带连 锁的不利基因， 如高芥酸、 高硫苷等， 因此需要对导入白菜优异性状的甘蓝型油菜进行选 育。 [0004]传统的油菜育种依赖于育种家对具体油菜材料在田间的表型的观察与评价， 受到 自然环境和个人经验的影响， 其育种周期长， 效率低。 分子标记技术的发展为提高育种效率 提供了新的手段， 使得育种家可以通过检测与主效基因紧密连锁的特定核苷酸序列， 即分 子标记来实现对目标基因的选择， 大幅度提高育种的准确度及缩短育种年限。 发明内容 [0005]本发明公开一种KASP分子标记引物， 具有快速、 特异性强、 灵敏度高的显著优点， 可应用于筛选、 鉴定或培育低芥酸油菜品种。 本发明基于SNP技术开发出一种BnaA.FAE1紧 密连锁KASP分子标记设计方法， 实现快速、 准确地检测油菜芥酸基因， 同时开发的KASP标记 可实现目标位 点的高效、 低成本和高通 量鉴定， 简化低芥酸甘蓝型油菜品种育种过程。 [0006]具体技术方案如下： [0007]一种KASP分子标记引物， 该KASP分子标记引物包括正向引物A、 正向引物B以及通 用反向引物， 具体如下： [0008]正向引物 A： [0009]5'‑gaaggtgaccaagttcatgctg ggacttttgggtaaatagctttggact‑3'； [0010]正向引物B： [0011]5'‑gaaggtcggagtcaacggattggacttttgggtaaatagctttggaca‑3'； [0012]通用反向引物： [0013]5'‑aacagagtggagacgtgccctacaag‑3'。 [0014]本发明还公开一种油菜芥酸含量基因BnaA.FAE 1特异KASP标记方法， 其特征在 于，说　明　书 1/6 页 3 CN 114457189 A 3