(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210252226.5 (22)申请日 2022.03.15 (71)申请人 上海市东方医院 （同济大 学附属东 方医院） 地址 200120 上海市浦东 新区即墨路15 0号 (72)发明人 俞作仁　赵倩　徐增光　刘中民　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 张梦泽 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 31/7105(2006.01) A61P 31/14(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 新冠病毒vmiRNA前体序列、 新冠病毒vmiRNA 及应用 (57)摘要 本发明提供了新冠病毒vmiRNA前体序列、 新 冠病毒vmiRNA及应用， 属于医学检验技术领域； 所述新冠病毒vmiRNA前体序列包 括nt 476‑‑‑nt  557、 nt 2122‑‑‑nt 2197和nt  2312‑‑‑nt 2380 中的一种或 几种。 本发明的新冠病毒vmiRNA前体 序列的5’臂及3’臂能够在人体细胞内表达出成 熟的vmiRNA 。 一方面这些vmiRNA可随细胞外泌体 分泌到外周血、 痰液、 唾液等体液， 可作为病毒感 染的诊断标志物。 另一方面， 这些vmiRNA在人体 细胞内可靶向人体基因， 影响其表达及功能， 与 新冠患者临床症状密切相关。 权利要求书1页 说明书10页 序列表14页 附图5页 CN 114774412 A 2022.07.22 CN 114774412 A 1.新冠病毒vmiRNA前体序列， 包括nt  476‑‑‑nt 557、 nt 2122‑‑‑nt 2197和nt   2312‑‑‑nt 2380中的一种或几种； 所述nt  476‑‑‑nt 557、 nt 2122‑‑‑nt 2197和nt   2312‑‑‑nt 2380的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.1～SEQ  ID NO.3所示。 2.权利要求1所述的新冠病毒vmiRNA前体序列在人体细胞内表达成熟的新冠病毒 vmiRNA。 3.根据权利 要求2所述的新冠病毒vmiRNA， 其特征在于， 所述新冠病毒vmiRNA包括核苷 酸序列如SEQ  ID NO.4～SEQ  ID NO.83所示的vmiRNA中的一种或几种。 4.权利要求1所述的新冠病毒vmiRNA前体序列或者权利要求2或3所述的新冠病毒 vmiRNA作为诊断标志物在制备用于预判新冠肺炎风险和/或诊断新冠肺炎的试剂盒或芯片 中的应用。 5.根据权利要求 4所述的应用， 其特 征在于， 所述应用的方法包括： 将受试者体液作为实验组， 检测受试者体液中的所述 新冠病毒vmiRNA的表达水平； 将健康人的正常体液作为对照组， 获得健康人的正常血样中的所述新冠病毒vmiRNA的 表达水平； 若所述实验组中的新冠病毒vmiRNA的表达水平高于对照组中的新冠病毒vmiRNA的表 达水平， 则判定存在新冠肺炎的风险或者已经发生了新冠肺炎 。 6.一种用于检测受试者体液中权利 要求2或3所述的新冠病毒vmiRNA的引物组； 所述引 物组包括第一引物、 第二引物和 第三引物中的一种或几种； 所述第一引物、 第二引物和第三 引物的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.84～SEQ  ID NO.86所示。 7.一种包 含权利要求5所述引物组的试剂盒。 8.权利要求6所述的引物组在制备用于预判新冠肺炎风险和/或诊断新冠肺炎的试剂 盒或芯片中的应用。 9.权利要求1所述的新冠病毒vmiRNA前体序列或者权利要求2或3所述的新冠病毒 vmiRNA的抑制剂在制备治疗新冠肺炎的药物中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述新冠病毒vmiRNA的抑制剂包括所述 新冠病毒vmiRNA的反义寡核苷酸。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774412 A 2新冠病毒vmiRNA前 体序列、 新冠病毒vmiRNA及应用 技术领域 [0001]本发明属于医学检验技术领域， 具体涉及新冠病毒vmiRNA前体序列、 新冠病毒 vmiRNA及应用。 背景技术 [0002]新冠疫情依旧是当前全球最关注的 “突发公共卫生事件 ”， 是人类健康面临的共同 挑战， 新冠肺炎的诊断国际上最普遍使用的方法是基于新冠病毒基因序列开发的核酸检 测， 受试样本包括鼻拭子、 咽 拭子、 下呼吸道标本等。 轻症患者可采集上呼吸道的鼻咽 拭子， 发病1～7天内采集。 重症及人工气道患者优先采集下呼吸道的痰液或肺泡灌洗液等标本。 根据最新版新冠病毒诊疗指南、 防控方案及实验室检测专家共识， 对新冠病毒的核酸检测 阴性结果不能排除新冠病毒感染， 需要考虑各环节中导致假阴性的原因， 包括样本质量、 口 咽部采样位置、 患者病期、 样本保存和运输方式、 以及其 他技术本身存在的原因等。 [0003]除了核酸检测之外， 抗体检测也是目前最常用的新冠感染诊 断方法。 根据2002年 非典SARS冠状病毒和2012年中东呼吸综合征MERS冠状病毒的研究结果， 病毒感染患者之后 3～6天可以在外周血检测到IgM抗体， 8天之后 可以检测到IgG抗体。 据此， 利用IgG或者IgM 抗体进行新冠病毒检测的试剂盒也在全球广泛使用。 其优点是患者恢复期病毒核酸检测阴 性， 但依旧能检测到抗体阳性， 缺 点是抗体特异性问题， 不能排除假阳性可能性。 [0004]核酸检测不能排 除假阴性， 抗体检测存在抗体特异性问题。 研发针对新冠病毒的 快速、 精准、 自动化检测新技术新方法、 筛查特异性高的新型生物标志物， 属于当下疫情诊 断亟待解决的紧迫问题。 [0005]病毒感染人体后， 有可能利用宿主细胞的酶系统， 对病毒RNA序列进行编辑或剪 切， 产生病毒来源的非编码miRNA衍生物。 病毒自身基因组可编码miRNA， 称之为病毒miRNA (vmiRNA)。 2004年， Pfeffer等首次发现埃博拉病毒基因组来源的vmiRNA。 近年来随着高通 量测序技术及生物信息学的发展， 在乙型肝炎病毒、 腺病毒、 流感病毒、 埃博拉病毒等感染 的哺乳动物细胞中， 均发现了vmi RNA。 vmiRNA反之又能调控宿主细胞， 抑制宿主细胞的免疫 识别和反应能力。 可见vmiRNAs能够 “驯化”或者“改造”宿主细胞接纳病毒的入侵， 在病毒感 染宿主导致疾病发生和发展的过程中发挥 “恶”性作用。 另有研究表明， vmiRNA在可 随着外 泌体分布在被感染者外周血等体液， 而且vmiRNA在血液中检测 到的时间， 要早于病毒基因 组核酸检测到的时间。 新冠病毒感染人体细胞之后， 病毒RNA序列可能利用宿 主细胞的酶系 统， 合成非编码mi RNA小分子衍生物， 后者能够随外泌体的分泌， 进入体液以及外周血。 但是 目前还没有新冠病毒vmiRNA的相关记载和报道。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本发明的目的在于提供新冠病毒vmiRNA前体序列、 新冠病毒vmiRNA及 应用， 本发明的新冠病毒vmiRNA前体序列衍生的vmiRNA可作为新冠病毒感染的诊断标志 物。说　明　书 1/10 页 3 CN 114774412 A 3