(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210253677.0 (22)申请日 2022.03.15 (71)申请人 龙岩学院 地址 364012 福建省龙岩市东肖镇 新罗区 东肖北路1号龙岩学院 (72)发明人 张鑫杰　戴爱玲　黄喜荣　杨小燕　 薛少华　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 田立媛 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型 的引物和方法 (57)摘要 本发明公开了一种同时检测猪圆环病毒2型 和猪细小病毒2型的PCR引物， 包括PCV2F： 5，‑ GCTAATTTTGCAGACCCGGAA ‑3，， 如SEQIDNO.1所示； PCV2R： 5，‑CCACTCCCGTTACTTCACACC ‑3，， 如 SEQIDNO .2所示； PPV2F： 5，‑AGCCCTAAGA CTGACTACAAGC ‑3，， 如SEQIDNO.3所示； PPV2 R： 5，‑ TCATGCACGTTTGTCTCGTTG ‑3，， 如SEQIDNO.4所示， 将引物应用于制备检测猪圆环病毒2型和猪细小 病毒2型试剂盒中， 为猪圆环病毒2型和猪细小病 毒2型在临床上的混合感染提供快速检测的技术 手段。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图4页 CN 114480743 A 2022.05.13 CN 114480743 A 1.一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物， 其特征在于， 包括下述 SEQ NO.1～SEQ  ID NO.4所示的序列： PCV2F： 5’ ‑GCTAATTTTGCAGACCCGGAA‑3’， 如SEQ ID NO.1所示； PCV2R： 5’ ‑CCACTCCCGTTACTTCACACC‑3’， 如SEQ ID NO.2所示； PPV2F： 5’ ‑AGCCCTAAGACTGACTACA AGC‑3’， 如SEQ ID NO.3所示； PPV2R： 5’ ‑TCATGCACGT TTGTCTCGT TG‑3’， 如SEQ ID NO.4所示。 2.权利要求1所述的一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物在制备 检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型 试剂盒中的应用。 3.一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的试剂盒， 其特征在于， 包括： SEQ   NO.1～SEQ  NO.4所述的引物； 其中， SEQ  ID NO.1～SEQ  ID NO.2引物各0.5 μL， SEQ  ID NO.3 ～SEQ ID NO.4引物各1 μL。 4.根据权利要求3所述的一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的试剂盒， 其 特征在于， 还 包括： 2×Taq Master Mix   10 μL 模板DNA             2 μL ddH2O       补充至20 μL。 5.一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的方法， 其特征在于， 对待检测样本 以权利要求4所述试剂盒进行扩增， 猪圆环病毒2型的扩增产 物的大小为666b p， 猪细小病毒 2型的扩增产物的大小为254bp， 根据 产物大小不同进行区分。 6.根据权利要求5所述的一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的方法， 其特 征在于， 扩增的反应程序为： 权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480743 A 2同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的引物和方 法 技术领域 [0001]本发明涉及猪圆环病毒和细小病毒检测技术领域， 更具体地说是涉及同时检测猪 圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物和方法。 背景技术 [0002]猪圆环病毒(Porcine  circovirus,P CV)是一类单股环状、 无囊膜的DNA病毒， 其基 因组大小约1.7～2.0kb， 包含两个主要的开放阅读框(ORF)， 涉及编码病毒的复制酶蛋白 Rep及衣壳蛋白(capsid  protein,Cap)。 PCV1首次被发现于1974年， 当时被认为是细胞培养 的污染物， 无致病性。 而PCV2被认 为是引起猪圆环病毒病(PCVD)和猪圆环相关疾病(PCVAD) 的主要病原体， 主要包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、 猪 皮炎与肾病综合征(PDNS)、 猪繁殖障碍及猪呼吸道疾病综合征(PRDC)， 严重威胁 猪群健康。 [0003]猪细小病毒(Porcine  parvovirus， PPV)是一类单股线性DNA病毒， 无囊膜， 基因组 大小约4～6kb， 其同样包含两个主要的ORF， ORF1编码病毒的非结构蛋白(NSP)， ORF2编码病 毒的Cap蛋白。 1965年， PPV1首次分离于德国， 被认为是引起世界范围内猪繁殖障碍的主要 原因之一， 感染后可造成猪的SMEDI(stillbirth,mummification,embryonic  death and  infertility,SMEDI),即母猪产死胎、 木乃伊胎、 胚胎发育不良和死亡及母猪不孕等。 而 PPV2～7是通过宏基因组测序发现的新型PPV。 目前已有的研究均表明PPV2是PRDC潜在的致 病因子。 [0004]PRDC是由多种因素共同引起的呼吸道疾病， 主要见于1至3个月大的猪。 而PCV2是 其最为常见的致病原之一， 通常与多种致病原混合感染共同引起PRDC， 其中便包括P PV2。 [0005]目前有针对PCV2及PPV2单一的PCR诊断方法。 多重PCR检测方法能够在一个反应体 系中一次性对两种或多种病原进 行PCR扩增， 从而达到节约检测时间及检测成本的目的。 但 目前并无可以同时对PCV2和PPV2两种病毒进行检测的双重PCR检测方法。 因此， 迫切需要发 展快速， 准确的猪圆环病毒2型与猪细 小病毒2型双重P CR检测方法， 为两者在临床上的混合 感染提供 快速检测的技 术手段。 [0006]因此， 如何提供一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型的PCR引物和检测 方法是本领域 技术人员亟需解决的问题。 发明内容 [0007]有鉴于此， 本 发明提供了一种可以对猪圆环病毒2型和猪细小病毒2型同时进行检 测的引物和方法， 为两者在临床上的混合感染提供 快速检测的技 术手段 [0008]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0009]一种同时检测猪圆环病毒2型和猪细小病毒2 型的PCR引物， 其特征在于， 包括下述 SEQ NO.1～SEQ  ID NO.4所示的序列： [0010]PCV2F： 5’ ‑GCTAATTTTGCAGACCCGGAA‑3’， 如SEQ ID NO.1所示； [0011]PCV2R： 5’ ‑CCACTCCCGTTACTTCACACC‑3’， 如SEQ ID NO.2所示；说　明　书 1/6 页 3 CN 114480743 A 3