(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210277025.0 (22)申请日 2022.03.16 (71)申请人 中南大学湘雅二医院 地址 410000 湖南省长 沙市芙蓉区人民中 路139号 (72)发明人 肖嵘　邹璞玉　曾茁桐　邓前程　 史雅倩　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 王欢 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) G01N 33/68(2006.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 45/00(2006.01)A61P 17/00(2006.01) (54)发明名称 OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜风 诊断试剂盒 或药物中的应用 (57)摘要 本发明涉及生物医药技术领域， 尤其涉及 OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜风诊断 试剂盒或药物中的应用。 本发明首次发现了OCLN 基因在白癜风患者CD8+T细胞中表达异常升高， 且OCLN的表达 水平与疾病活动性有关， 提示其可 以成为白癜风检测的生物标志物， 并可应用于诊 断试剂盒的开发与应用； OCLN检测诊断白癜风能 够更加及时反映白癜风患者的疾病活动状态， 为 白癜风的诊疗提供重要依据。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图3页 CN 114507729 A 2022.05.17 CN 114507729 A 1.CD8+T细胞OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜风诊断试剂盒或治疗白癜风的药 物中的应用。 2.检测CD 8+T细胞OCL N基因或其蛋白的物质在制备白癜 风诊断试剂中的应用。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述物质包括引物、 抗体以及检测所述 OCLN基因或其蛋白的其 他试剂。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述OCLN基因检测引 物包括SEQ  ID NO:1 所示的上游引物和SEQ  ID NO:2所示的下游引物。 5.根据权利要求1～4任一项所述的应用， 其特征在 于， 所述CD8+T细胞为外周血CD8+T细 胞或皮肤组织CD 8+T细胞。 6.一种检测白癜风的PCR试剂盒， 其特征在于， 以CD8+T细胞OCLN基因作为生物标志物， 包括CD8+T细胞分离系统、 CD8+T细胞总RNA提取系统、 反转录系统、 扩增OCLN  cDNA和内参 cDNA系统， 以及相对定量内参标准 化系统。 7.根据权利要求6所述的试剂盒， 其特征在于， 所述扩增OCLN  cDNA以及内参cDNA系统 包括： cDNA模板、 检测GAPDH的引物对、 检测OCLN基因的引物对、 2 ×SYBR GreenMix和RNase ‑ free water。 8.根据权利要求6所述试剂盒， 其特征在于， 所述检测GAPDH的引物对包括核苷酸序列 如SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ  ID NO.2所示的下游引物； 所述相对定量内参标准化 系统为GAPDH， 所述检测GAPDH的引物对包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的上游引物和 SEQ ID NO.4所示的下游引物。 9.OCLN基因或其蛋白的抑制剂在制备治疗白癜 风的药物中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述OCLN抑制剂为具有(1)～(2)中至少 一种功能的DNA、 RNA、 蛋白或化学 药物： (1)抑制OCL N基因表达或使OCL N基因沉默； (2)抑制OCL N蛋白水平或使OCL N蛋白不表达或失活的物质， 所述物质。 11.根据权利要求10所述的应用， 其特 征在于， 所述RNA为OCL N siRNA或OCL NshRNA。 12.一种改善和/或治疗白癜 风的药物， 其特 征在于， 包括OCL N基因或其蛋白的抑制剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114507729 A 2OCLN基因或其蛋白作 为靶点在制备白癜风诊断试剂盒或药物 中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 尤其涉及OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜 风诊断试剂盒 或药物中的应用。 。 背景技术 [0002]白癜风(vitiligo)是一种获得性色素脱失性皮肤黏膜疾病， 其特征为黑素细胞被 选择性破坏， 导致皮肤、 黏膜和(或)毛发色素脱失。 白癜风的发病率约为 1％， 无种族和性别 偏向。 白癜风好发于颜面及其它暴露部位， 典型 的皮疹表现为边界清楚的乳白色色素脱失 斑， 表面光滑。 由于白癜风是一种损容性皮肤病， 它容易引起患者强烈的羞耻感， 造成患者 出现沉重的心理负担 。 [0003]白癜风的机制尚不明确， 目前的研究普遍认为自身免疫是导致白癜风发生和发展 的主要机制， 遗传、 氧化应激以及环境等因素也对白癜风的发生 发展有一定影响。 其中， CD8 + T细胞对于黑素细胞的破坏起着关键作用。 CD8+ T细胞是T淋巴细胞的一个亚群， 在总 T淋 巴细胞中占20％ ‑30％左右。 CD8+ T细胞活化后变为细胞毒性T淋巴细胞， 能特异性直接杀 伤黑素细胞。 [0004]OCLN主要表达在 内皮细胞， 上皮细胞， 角质形成细胞等细胞中， 编码闭合蛋白(又 称封端蛋白)occludin。 Occludin与ZO ‑1， Claudin等蛋白共同组成紧密连接复合体。 它是一 种四次跨膜蛋白， 一侧细胞上的occludin与另一侧细胞上的occludin结合， 再通过胞内铆 锚定ZO‑1、 ZO‑2、 ZO‑3、 claudin ‑1等蛋白稳固连接,形成紧密连接复合体。 它具有多种生理 病理功能， 如调节血脑屏障、 肠上皮屏障以及皮肤表面屏障的通透性。 当OCLN在缺乏紧密连 接的细胞中表达时， 它能够诱导粘附。 已有文 献报道， Takahito  Saito等的研究表明OCLN在 激活的γ δT细胞中表达 升高， 并且参与γ δT细胞从表皮到淋巴结的迁移。 [0005]越来越多研究表明以occludin为主的紧密连接蛋白在色素性皮肤病里发挥了重 要作用。 OCLN为白癜风发病机制的研究提供了新的思路， 同时也为白癜风的诊疗提供了新 的策略。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本发明提供了OCLN基因或其蛋白作为靶点在制备白癜风诊断试剂盒或 药物中的应用。 [0007]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0008]本专利的申请人通过Illumina  HiSeq二代测序， 首次从5位白癜风病人皮损和5位 正常人皮肤中直接提取CD8+ T细胞， 进行了微量细胞转录组信息采集和分析， 发现OCLN在 白癜风皮损中表达 升高。 [0009]本发明在白癜风外周血CD8+ T细胞以及健康对照CD8+ T细胞中， 通过实时定量PCR 检测以及westernbl ot实验发现， 白癜 风外周血CD 8+ T细胞中OCL N基因表达 升高。说　明　书 1/7 页 3 CN 114507729 A 3