(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210258325.4 (22)申请日 2022.03.16 (71)申请人 华智生物技 术有限公司 地址 410000 湖南省长 沙市芙蓉区合平路 618号 (72)发明人 谢心悦　唐顺学　田冰川　雷雨婷　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 马俊 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 用于检测耐咪唑酮类除草剂向日葵的引物 组、 试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了用于检测耐咪唑酮类除草剂 向日葵的引物组、 试剂盒及其应用， 所述引物组 为AHAS1‑HT3.1和/或AHAS1 ‑HT3.2。 本发明通过 结合KASP标记 检测方法， 运用高通量、 高自动化、 低成本的检测方式， 显著提高抗咪唑啉酮类除草 剂抗性植株的检测效率与检测普适性。 可以快速 有效地鉴定耐咪唑啉酮类除草剂的向日葵， 且 稳 定性好、 通量高， 在向日葵的育种和辅助育种过 程中具有重要意 义。 权利要求书2页 说明书16页 序列表5页 附图9页 CN 114622030 A 2022.06.14 CN 114622030 A 1.引物组， 所述引物组为AHAS1 ‑HT3.1和/或AHAS1 ‑HT3.2； 所述AHAS1 ‑HT3.1包含特异性引物Primer  Allele X1、 特异性引物Primer  Allele Y1 和通用引物1， 所述特异性引物Primer  Allele X1的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示， 所述 特异性引物Primer  Allele Y1的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 所述通用引物1的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.4所示； 所述AHAS1 ‑HT3.2包含特异性引物Primer  Allele X2、 特异性引物Primer  Allele Y2 和通用引物2， 所述特异性引物Primer  Allele X2的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示， 所述 特异性引物Primer  Allele Y2的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示， 所述通用引物2的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.7所示。 2.根据权利要求1所述的引物组， 其特征在于， 所述特异性引物Primer  Allele X1和特 异性引物Primer  Allele Y1的5’端分别带有序列标签A和序列标签B， 所述序列标签A和序 列标签B的核苷酸序列互不相同并且与向日葵基因 组序列不同源； 所述特异性引物Primer  Allele X2和特异性引物Primer  Allele Y2的5’端分别带有 序列标签A和序列标签B， 所述序列标签A和序列标签B的核苷酸序列互不相同并且与向日葵 基因组序列不同源； 优选地， 所述序列标签A为GA AGGTGACCAAGTTCATGCT(SEQ  ID NO.8)； 优选地， 所述序列标签B为GA AGGTCGGAGTCAACGGATT(SEQ ID NO.9)。 3.一种试剂盒， 包 含： 权利要求1或2所述的引物组。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包含PCR预混液， 所述PCR 预混液包 含荧光探针A、 荧 光探针B、 淬灭探针A和淬灭探针B； 所述荧光探针A的核苷酸序列与序列标签A的核苷酸序列一致， 所述荧光探针A的5 ’端 连接荧光基团A； 所述淬灭探针A的核苷酸序列与序列标签A的核苷 酸序列反向互补， 所述淬 灭探针A的3 ’端连接淬灭基团； 所述荧光探针B的核苷酸序列与序列标签B的核苷酸序列一致， 所述荧光探针B的5 ’端 连接荧光基团B； 所述淬灭探针B的核苷酸序列与序列标签B的核苷 酸序列反向互补， 所述淬 灭探针A的3 ’端连接淬灭基团； 优选地， 所述 荧光基团A与荧 光基团B互不相同。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述荧光基团A、 荧光基团B选自FAM或 HEX。 6.一种基因芯片， 其特 征在于， 包括权利要求1或2所述的KAS P标记引物。 7.如权利要求1或2所述的引物组、 权利要求3 ‑5任一项所述试剂盒和/或权利要求6所 述的基因芯片的以下任一应用： (1)在鉴定或辅助鉴定耐咪唑啉酮类除草剂的向日葵中的应用； (2)在制备鉴定或辅助鉴定耐咪唑啉酮类除草剂的向日葵的产品中的应用； (3)在选育具有耐咪唑啉酮类除草剂的向日葵中的应用； (4)在制备选 育具有耐咪唑啉酮类除草剂的向日葵产品中的应用； (5)在向日葵 育种中的应用； (6)在制备向日葵 育种的产品中的应用。 8.一种向日葵咪唑啉酮类除草剂抗性的检测方法， 其特征在于， 所述检测方法包括以权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114622030 A 2下步骤： S1、 提取待测向日葵基因 组DNA； S2、 以步骤S1中提取的基因组DNA为模板， 利用权利要求1 ‑3任一项所述的KASP标记引 物、 权利要求 4或5所述的试剂盒进行 KASP反应检测， 获得待测向日葵的基因型 数据； S3、 根据步骤S2所述的基因型 数据， 判断 向日葵对咪唑啉酮类除草剂的抗 性。 9.根据权利要求8所述的检测方法， 其特征在于， 所述待测向日葵样品的品种包括油 葵、 食葵和观赏向日葵中的至少一种。 10.一种向日葵育种方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 采用 如权利要求8所述的方法， 选择耐受咪唑啉酮类除草剂的向日葵的进行后续育种。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114622030 A 3