(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210263206.8 (22)申请日 2022.03.17 (66)本国优先权数据 202110537809.8 2021.0 5.18 CN (71)申请人 中国水产科 学研究院黄海水产研究 所 地址 266071 山东省青岛市 市南区南京路 106号 (72)发明人 王佳佳　李吉涛　李健　刘萍　 王琼　秦桢　 (74)专利代理 机构 北京科家知识产权代理事务 所(普通合伙) 11427 代理人 沈小明 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 凡纳滨对虾微卫星标记的引物组合及应用 (57)摘要 本发明涉及一种凡纳滨对虾微卫星标记的 引物组合及应用， 属于分子生物学技术领域， 微 卫星分子标记的核苷酸序列依次如SEQ  ID  No.1‑14所示， 所述微卫星分子标记引物的核苷 酸序列如SEQ  ID No.15‑42； 微卫星分子标记稳 定扩增且具有多态性的， 可用于凡纳滨对虾种质 资源遗传 多样性和遗传结构分析及家系鉴定， 为 凡纳滨对虾的遗传改良提供新的工具。 权利要求书1页 说明书8页 序列表9页 附图8页 CN 114410806 A 2022.04.29 CN 114410806 A 1.一种凡纳滨对虾微卫星标记的引物组合， 其特征在于所述微卫星分子标记引物的核 苷酸序列如SEQ  ID No.15‑42所示。 2.根据权利要求1所述的一种凡纳滨对虾微卫星标记的引物组合， 其特征在于所述凡 纳滨对虾多态性微卫星分子标记引物组合对应的微卫星分子标记的名称分别为： Lv01、 Lv03、 Lv09、 Lv12、 Lv18、 Lv55、 Lv99、 Lv106、 Lv119、 Lv1291、 Lv1292、 Lv3201、 Lv3202和 Lv1969， 微 卫星分子标记的核苷酸序列依次如SEQ  ID No.1‑14所示。 3.权利要求1所述微卫星分子标记引物组合的应用， 其特征在于所述应用为凡纳滨对 虾的家系鉴定、 遗传多样性及遗传结构分析， 其具体的操作方法如下： (1)提取凡纳滨 对虾待检测样品的基因 组DNA； (2)以步骤(1 )获得的基因组DNA为模板， 利用微卫星分子标记的引物组合进行PCR扩 增， 获得PCR产物； (3)对PCR扩增产物进行多态性检测后， 根据扩增产物的分子量大小明确凡纳滨对虾个 体的基因型， 并计算 其遗传参数。 4.根据权利要求3所述 的应用， 其特征在于在步骤(2)对Lv01、 Lv18、 Lv119和Lv3201位 点的上游引物的5 ’端用FAM进行荧光标记， Lv03、 Lv55、 Lv1291和Lv3202位点的上游引物的 5’端用HEX进行荧光标记， Lv09、 Lv99、 Lv1292和Lv19 69位点的上游引物的5 ’端用ROX进行荧 光标记， Lv12和Lv106、 位点的上游引物的5 ’端用TAMRA进行荧光标记； 所述PCR扩增完成后， 具有不同5 ’端荧光标记的Lv01、 Lv03、 Lv09和Lv12的PCR产物混合到一个PCR管中检测， 具有 不同5’端荧光标记的Lv18、 Lv55、 Lv99和Lv106的PCR产物混合到一个PCR管中检测， 具有不 同5’端荧光标记的Lv119、 Lv1291、 Lv1292的PCR产物混合到一个PCR管中检测， 具有不同5 ’ 端荧光标记的Lv3201、 Lv3202和Lv1969的PCR产物混合到一个PCR管中检测。 5.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于所述的PCR反应体系包括10 μL  2×Reaction   Mix， 0.4 μL  Golden DNA Polymerase， 2 μL  DNA模板， 1 μL正向引物， 1 μL反向引物， 5.6 μL去离 子水； PCR反应程序如下： 95℃5mi n； 98℃30s， 55℃30s， 72℃3 0s， 35个循环； 72℃延伸10mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114410806 A 2凡纳滨对虾微卫星标记的引物组合及应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学技术领域， 具体涉及一种凡纳滨对虾微卫星标记的引物组 合及应用。 背景技术 [0002]凡纳滨对虾(Litopenaeus  vannamei)又称南美白对虾， 其野生群体主要分布于墨 西哥至秘鲁太平洋沿岸， 具有温度、 盐度适应性广， 生长速度快， 抗病力强等优点。 自1988年 引入我国并开展养殖以来， 凡纳滨对虾已经发展成为 我国重要的经济虾类， 产量占海水养 殖虾类总量的70％。 目前， 我国已成为世界上凡纳滨对虾养殖产量最高的国家。 然后随着养 殖产量的增大， 随之而来的问题增多， 种虾常年累代近交养殖、 育种保种技术落后以及病害 检验检疫松懈等导致其遗传多样性降低、 种质退化严重、 病害暴 发频繁等现象发生， 这对我 国对虾养殖业的经济效益及可持续发展造成了严重的影响。 因此， 在凡纳滨对虾遗传选育 过程中， 及时评估已有群体的遗传资源现状， 认清不同群体甚至个体间的分子遗传背景差 异， 制定合理配种方案， 是优化国内凡纳滨 对虾种质的有效途径。 [0003]遗传多样性是评估遗传资源状况的有效途径， 其中基于微卫星标记的遗传多样性 分析是最常用且有效的分子标记方法。 微卫星标记凭借其多态性高、 信息量多、 重复性强、 技术难度低等优点， 被广泛应用于水产动物的遗传结构分析、 种质评价及亲子鉴定等研究。 因此在全基因组水平上筛选微卫星标记对于全面系统评估群体的多样性和遗传结构具有 十分重要的价 值。 发明内容 [0004]本发明要解决的技术问题在于提供一种凡纳滨对虾微卫星标记的引物组合及应 用， 即筛选获得稳定扩增且具有多态性的微卫星分子标记， 并应用于凡纳滨对虾群体遗传 多样性、 遗传结构分析以及家系鉴定等。 [0005]本发明首先提供一种凡纳滨对虾微卫星标记的引物组合， 所述微卫星分子标记引 物的核苷酸序列如SEQ  ID No.15‑42所示。 [0006]进一步， 所述凡纳滨对虾多态性微卫星分子标记引物组合对应的微卫星分子标记 的名称分别为： Lv01、 Lv03、 Lv09、 Lv12、 Lv18、 Lv55、 Lv99、 Lv106、 Lv119、 Lv1291、 Lv1292、 Lv3201、 Lv3202和Lv1969， 微 卫星分子标记的核苷酸序列依次如SEQ  ID No.1‑14所示。 [0007]本发明还提供的所述微卫星分子标记引物组合的应用， 所述应用为 凡纳滨对虾的 家系鉴定、 遗传多样性及遗传结构分析， 其具体的操作方法如下： [0008](1)提取凡纳滨 对虾待检测样品的基因 组DNA； [0009](2)以步骤(1)获得的基因组D NA为模板， 利用微卫星 分子标记的引物组合进行PCR 扩增， 获得PCR产物； [0010](3)对PCR扩增产物进行多态性检测后， 根据 扩增产物的分子量大小明确凡纳滨对 虾个体的基因型， 并计算 其遗传参数。说　明　书 1/8 页 3 CN 114410806 A 3