(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210262804.3 (22)申请日 2022.03.17 (71)申请人 公安部物证鉴定中心 地址 100038 北京市西城区木樨地 南里17 号楼 (72)发明人 金鑫　张颖　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 关畅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 牛STR复合扩增检测试剂盒、 引物组合物及 其应用 (57)摘要 本发明公开了牛STR复合扩增检测试剂盒、 引物组合物及其应用。 具体地公开了同时扩增牛 14个STR位点的引物组合物， 所述14个S TR位点分 别为TGLA227、 BM2113、 ET H10、 SPS115、 ILSTS006、 TGLA126、 TGLA122、 INRA023、 BM1818、 ETH225、 BM1824、 CSRM60、 HAUT27和CSSM66， 所述引物组合 物由核苷酸序列分别如SEQ  ID No.1‑28所示的 引物组成。 本发 明用于牛个体识别与亲权鉴定的 引物组合物、 试剂盒及检测方法灵敏度高、 稳定 性好， 可实现样本直接扩增， 使用方法简单， 符合 牛DNA相关案件检验及DNA数据库建 设要求。 权利要求书3页 说明书11页 序列表5页 附图2页 CN 114561477 A 2022.05.31 CN 114561477 A 1.用于扩增牛14个STR位点的引物 组合物， 其特征在于， 所述引物 组合物由扩增如下14 个STR位点的引物对组成： TGLA227、 BM2113、 ETH10、 SPS115、 ILSTS006、 TGLA126、 TGLA122、 INRA023、 BM1818、 ETH2 25、 BM1824、 CSRM 60、 HAUT27和CSSM66， 其中： 扩增TGLA227的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.1的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.2的DNA； 扩增BM2113的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.3的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.4的DNA； 扩增ETH10的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.5的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.6的DNA； 扩增SPS115的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.7的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.8的DNA； 扩增ILSTS006的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.9的DNA和核苷酸序列是SEQ   ID No.10的DNA； 扩增TGLA126的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.11的DNA和核苷酸序列是SEQ   ID No.12的DNA； 扩增TGLA122的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.13的DNA和核苷酸序列是SEQ   ID No.14的DNA； 扩增INRA023的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.15的DNA和核苷酸序列是SEQ   ID No.16的DNA； 扩增BM1818的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.17的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.18的DNA； 扩增ETH225的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.19的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.20的DNA； 扩增BM1824的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.21的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.22的DNA； 扩增CSRM60的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.23的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.24的DNA； 扩增HAUT27的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.25的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.26的DNA； 扩增CSSM66的引物对分别是核苷酸序列是SEQ  ID No.27的DNA和核苷酸序列是SEQ  ID  No.28的DNA。 2.根据权利要求1所述的引物组合物， 其特征在于， 所述引物组合物按照STR位点分为 四组， 所述引物组合物由第一组STR位点的扩增引物、 第二组STR位点的扩增引物、 第三组 STR位点的扩增引物和第四组STR位 点的扩增引物组成， 第一组STR位 点的组成如下： TGLA 227、 BM2113、 ETH10、 S PS115和ILSTS006； 第二组STR位 点的组成如下： TGLA126、 TGLA12 2、 INRA023和BM1818； 第三组STR位 点的组成如下： ETH2 25和BM1824； 第四组STR位 点的组成如下： CSRM 60、 HAUT27和CSSM66； 所述第一组STR位点的扩增引物、 第二组STR位点的扩增引物、 第三组STR位点的扩增引权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114561477 A 2物和第四组STR位 点的扩增引物采用的荧 光染料标记物彼此不同。 3.根据权利要求2所述的引物组合物， 其特征在于， 所述第一组STR位点的扩增引物采 用的荧光染料标记物为6 ‑FAM； 所述第二组STR位点的扩增引物采用的荧光染料标记物为 HEX； 所述第三组STR位点的扩增引物采用的荧光染料标记物为TAMRA； 所述第四组STR位点 的扩增引物采用的荧 光染料标记物为ROX。 4.用于扩增牛14个STR位点的试剂， 其特征在于， 所述试剂包括权利要求1 ‑3中任一所 述的引物组合物。 5.根据权利要求 4所述的试剂， 其特 征在于， 所述试剂为溶 液， 所述试剂中， SEQ ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所示的引物的浓度为0.125 μM； SEQ ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示引物的浓度为0.25 μM； SEQ ID NO： 5和SEQ  ID NO： 6所示引物的浓度为0.5 μM； SEQ ID NO： 7和SEQ  ID NO： 8所示引物的浓度为0.25 μM； SEQ ID NO： 9和SEQ  ID NO： 10所示引物的浓度为0.5 μM； SEQ ID NO： 11和SEQ ID NO： 12所示引物的浓度为0.25 μM； SEQ ID NO： 13和SEQ  ID NO： 14所示引物的浓度为0.25 μM； SEQ ID NO： 15和SEQ  ID NO： 16所示引物的浓度为0.5 μM； SEQ ID NO： 17和SEQ  ID NO： 18所示引物的浓度为0.25 μM； SEQ ID NO： 19和SEQ  ID NO： 20所示引物的浓度为0.25 μM； SEQ ID NO： 21和SEQ  ID NO： 22所示引物的浓度为0.25 μM； SEQ ID NO： 23和SEQ  ID NO： 24所示引物的浓度为0.25 μM； SEQ ID NO： 25和SEQ  ID NO： 26所示引物的浓度为0.25 μM； SEQ ID NO： 27和SEQ  ID NO： 28所示引物的浓度为0.25 μM 。 6.一种试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含权利要求1 ‑3中任一所述的引物组合物， 或包含权利要求 4或5所述的试剂。 7.一种扩增牛14个STR位 点的方法， 其特 征在于， 所述方法包括如下步骤： A1)提取待测样本DNA； A2)以所述DNA为模板， 利用权利 要求1‑3中任一所述的引物组合物， 或权利要求4或5所 述的试剂进行PCR扩增， 得到扩增产物； A3)采用毛细管电泳进行检测。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增中采用的PCR反应温度程序 为： 95℃ 11分钟； 94℃  30秒， 59℃  2分钟， 72℃  45秒， 27‑29个循环； 60℃  30分钟； 4℃保 存。 9.根据权利要求7或8所述的方法， 其特 征在于， 所述待测样本为牛组织或血 液。 10.权利要求1 ‑3中任一所述的引物组合物， 和/或， 权利要求4或5所述的试剂， 和/或， 权利要求6所述的试剂盒， 和/或， 权利要求7 ‑9中任一所述的方法在下述任一项中的应用： B1)牛个体识别或制备 牛个体识别的产品； B2)牛亲缘关系鉴定或制备 牛亲缘关系鉴定的产品； B3)牛群体遗传学分析或制备 牛群体遗传学分析的产品； B4)牛DNA相关案件检验或制备 牛DNA相关案件检验的产品；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114561477 A 3