(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210264632.3 (22)申请日 2022.03.17 (71)申请人 烟台大学 地址 264005 山东省烟台市莱山区清泉路 30号 (72)发明人 付秀丽　李凤玲　 (74)专利代理 机构 沈阳科苑专利商标代理有限 公司 210 02 专利代理师 李颖 (51)Int.Cl. B01L 3/00(2006.01) G01N 21/78(2006.01) C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6816(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种基于框架核酸检测病毒的旋转型微流 控纸芯片及其制备方法 (57)摘要 本发明涉及微流控芯片技术、 DNA纳米技术 和光学分析领域， 具体是一种基于框架核酸检测 新型冠状病毒和/或流感病毒的旋转型微流控纸 芯片及其制备方法。 旋转型微流控纸芯片由两张 印刷有不同微流控通道的上层检测盘滤纸和下 层洗涤盘滤纸对应叠加 固定构成可旋转的微流 控通道体系； 其中， 上层检测盘滤纸上设置多个 检测位点； 下层洗涤盘滤纸上设置与上层检测盘 滤纸检测位点相对应的孔洞， 任意相邻的两个孔 洞之间沿径设置洗涤通道。 本发 明在一个框架核 酸功能化的旋转型微流控纸芯片分析装置上完 成了从样 本输入到检测结果输出的全部过程， 具 有操作简单、 检出限低、 选 择性好等优势， 为临床 诊断提供了一种新型装备与策略， 适用于现场、 即时、 快速 检测。 权利要求书2页 说明书10页 附图4页 CN 115228517 A 2022.10.25 CN 115228517 A 1.一种基于框架核酸检测病毒的旋转型微流控纸芯片， 其特征在于： 旋转型微流控纸 芯片由两张印刷有不同微流控通道的上层检测盘滤纸和下层洗涤盘滤纸对应叠加固定构 成可旋转的微 流控通道体系； 其中， 上层检测盘滤纸上设置多个 检测位点； 下层洗涤盘滤纸上设置与 上层检测盘滤纸检测位点相对应的孔洞， 任意相邻的两个孔 洞之间沿径设置 洗涤通道。 2.按权利要求1所述的基于框架核酸检测病 毒的旋转型微流控纸芯片， 其特征在于： 所 述上层检测盘滤纸和下层洗涤盘滤纸对应叠加， 中心通过铆钉连接， 使上下两层能够相对 旋转。 3.按权利要求1所述的基于框架核酸检测病 毒的旋转型微流控纸芯片， 其特征在于： 所 述上层检测盘滤纸上的多个检测位点位于同一圆周上， 且上层检测盘滤纸除检测位点以外 的区域均为疏 水区域； 下层洗涤盘滤纸上的孔洞以及洗涤通道一端位于同一圆周上， 且下层洗涤盘滤纸除孔 洞和洗涤通道以外区域均为疏 水区域。 4.按权利要求1 ‑3任意一项所述的基于框架核酸检测病毒的旋转型微流控纸芯片， 其 特征在于： 所述上层检测盘滤纸和下层洗涤盘滤纸以中心为旋转中心自由旋转， 检测时上 层检测盘滤纸的检测位 点和下层洗涤盘滤纸 孔洞重叠； 洗涤时旋转上层检测盘滤纸， 检测位点与下层洗涤盘滤纸上洗涤通道的一端重叠， 构 成流通通道。 5.按权利要求1 ‑3任意一项所述的基于框架核酸检测病毒的旋转型微流控纸芯片， 其 特征在于： 所述上层检测盘滤纸上设置多个 检测位点内添加检测病毒的功能化框架核酸。 6.按权利要求5所述的基于框架核酸检测病 毒的旋转型微流控纸芯片， 其特征在于： 所 述功能化框架核酸由四条单链DNA自组装形成为正四面体结构， 组装正四面体结构中的四 条单链DNA中任意三条单链DNA的5 ′端修饰有生物素， 另一条未修饰的单链DNA的任意一个 端延伸出正四面体结构， 其中， 延伸出的序列为能够与待检测病毒识别DNA分子互补。 7.一种权利要求1所述的基于框架核酸检测病毒的旋转型微流控纸芯片的制备方法， 其特征在于： 步骤1： 首先利用画图软件设计出纸芯片图样， 通过采用蜡印技术将设计的多通道芯片 图样打印到滤纸上， 获得上层检测盘滤纸和下层洗涤盘滤纸， 将打印完成的滤纸进 行烘干， 冷却至室温后， 得到亲 水区和疏 水区相间的纸芯片， 组装获得自由旋转的多通道纸芯片； 步骤2： 将下层洗涤盘滤纸的洗涤通道转离上层检测盘滤纸的检测位点， 在检测盘的检 测位点依次加入壳聚糖溶 液、 戊二醛 溶液、 链霉亲和素和功能化框架核酸， 室温干燥； 步骤3： 检测时上层检测盘滤纸的检测位点和下层洗涤盘滤纸孔洞重叠； 洗涤时旋转上 层检测盘滤纸， 检测位 点与下层洗涤盘滤纸上洗涤通道的一端重 叠， 构成流 通通道。 8.一种权利要求1所述的基于框架核酸检测病毒的旋转型微流控纸芯片的应用， 其特 征在于： 所述基于框架核酸检测病毒的旋转型微流控纸芯片在定量和/或定性分析检测新 型冠状病毒或流感病毒中的应用。 9.一种检测病 毒的方法， 其特征在于： 将待检测样品加入至权利要求1所述旋转型微流 控纸芯片的检测位点孵育5 ‑15分钟； 而后旋转芯片上层检测 盘滤纸， 检测位点与下层洗涤权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115228517 A 2盘滤纸上洗涤通道的一端重叠采用含Tween ‑20的PBS溶液进行洗涤， 洗涤后再次旋转芯片 上层检测 盘滤纸使检测位点和下层洗涤盘滤纸孔洞重叠， 向检测位点加入待检测DNA分子 室温孵育5 ‑15分钟； 旋转芯片上层检测盘滤纸经PBS溶液进 行洗涤， 洗涤后向检测位点加入 链霉亲和素标记的过氧化氢酶(SA ‑HRP)孵育5 ‑15分钟； 旋转芯片上层检测盘滤纸经PBS溶 液进行洗涤， 洗涤后再次旋转芯片上层检测盘向检测位点加入2 ‑6 μL显色剂产生颜色信号， 采用手机或相机拍照方式， 利用ImageJ软件进行灰度值分析， 根据灰度值和样本浓度的关 系， 实现对新型 冠状病毒和流感病毒的定量和/或定性分析检测。 10.按权利要求9所述的检测病毒的方法， 其特征在于： 根据灰度值的大小判断检测样 本的阴阳性及病毒类型。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115228517 A 3