(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210273148.7 (22)申请日 2022.03.18 (71)申请人 国科赛赋河北医药技 术有限公司 地址 065000 河北省廊坊市固安县 工业区 南区环保产业园8号楼 (72)发明人 梁宗星　董延生　韩刚　赵亚青　 巨亚坤　陈计霞　李秀秀　 (74)专利代理 机构 北京睿博行远知识产权代理 有限公司 1 1297 专利代理师 罗玉姣 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种测定人体细胞在动物体内分布的方法 (57)摘要 本发明公开了一种测定人细胞在动物体内 分布的方法， 涉及生物医药领域， 本发明荧光定 量PCR法测定包括食蟹猴在内的实验动物全血及 组织中人体细胞含量， 用于研究人源细胞在动物 体内的分布。 本发明相比于现有技术， 直接研究 人细胞， 无需构建载体， 实验方法简单、 结果可 靠、 实验过程简单， 前期不需要摸索条件构建载 体， 不需要测序比对， 检测范围宽、 灵敏度高， 检 测方法特异性高： 本方法共考察了10个不同个体 来源的空白食蟹猴肝组织匀浆液样本， 10个个体 的样本在40 个循环中均未 见扩增现象。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115044679 A 2022.09.13 CN 115044679 A 1.一种测定人体细胞在动物体内分布的方法， 其特征在于， 所述测定方法具体包括如 下步骤： S1： 取空白动物(比如食蟹猴)的全血或组织匀浆液(比如肝)作为稀释液， 将受试物人 源细胞(比如组织间充质干细胞)稀释成不同浓度的标准曲线样本； S2： 使用提取试剂盒对标准曲线样本进行DNA提取， 以提取后DNA为模板， 使用基于人科 动物特异性基因US P6设计的引物探针进行荧 光定量PCR； S3： 不同浓度标准曲线样本进行PCR得到各自不同的Ct值， 使用仪器系统软件以标准曲 线样本中人细胞浓度对数值 为横坐标， Ct值 为纵坐标， 绘制标准曲线； S4： 将未知浓度样本采用与标准曲线样本相同的方法进行组织匀浆、 提取DNA和qPCR扩 增， 获得未知浓度样本的Ct值， 再将Ct值代入标准曲线中即得 未知样本的浓度。 2.根据权利要求1所述的一种测定人体细胞在动物体 内分布的方法， 其特征在于， 所述 步骤S1中组织匀浆液的制备具体步骤包括： 取 空白食蟹猴的脑、 心、 肝、 脾、 肺、 肾等组织， 高 通量组织经研磨器 研磨得到匀浆液。 3.根据权利要求1所述的一种测定人体细胞在动物体 内分布的方法， 其特征在于， 所述 受试物重悬液 的制备步骤具体包括： 将受试物人体细胞融化、 计数后直接加入到适量的组 织匀浆液/ EDTA抗凝全血中， 移液枪吹打 混匀制备成已知浓度的受试物重悬 液备用。 4.根据权利要求1所述的一种测定人体细胞在动物体 内分布的方法， 其特征在于， 所述 标准样本中包括6个或以上浓度的标准样本， 标准样本的制备具体步骤包括： 取 空白食蟹猴 组织匀浆液作为稀释液稀释受试物重悬 液， 得到标准曲线样本 。 5.根据权利要求1所述的一种测定人体细胞在动物体 内分布的方法， 其特征在于， 所述 特异性样本的制备具体步骤包括： 取受试物重悬液， 分别以10个不同个体来源的空 白食蟹 猴组织匀浆液作为稀释液 得到特异性 考察样本。 6.根据权利要求1所述的一种测定人体细胞在动物体 内分布的方法， 其特征在于， 所述 步骤S2中荧光定量PCR的具体方法包括： 使用基于人科动物特异性基因USP6设计的特异性 的引物探针。 7.根据权利要求1所述的一种测定人体细胞在动物体 内分布的方法， 其特征在于， 所述 步骤S3中定量PCR的具体方法包括： 将上述制得的标准曲线样本提取的DNA进行扩增， 以Ct 值为纵坐标， 样本浓度对数为横坐标建立标准 曲线， 推算出动物组织样本中人体细胞浓度 的回归方程。 8.根据权利要求1所述的一种测定人体细胞在动物体 内分布的方法， 其特征在于， 所述 步骤S4中将未知浓度样本获得的Ct值代入标准曲线中计算未知样本的浓度。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115044679 A 2一种测定人体细胞在动物体 内分布的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医药技术领域， 具体涉及 一种测定人体细胞在动物体内不同组织 含量的分析 方法。 背景技术 [0002]细胞是我们人体的基本组成单位， 人体衰老的原因就是体内细胞的衰老， 干细胞 是人体内具有自我复制和多潜能的原始细胞， 是体内各组织、 器官的原始细胞。 其中脂肪间 充质干细胞来源丰富， 取材方便， 细胞获取量大， 因此在医疗美容、 丰胸塑形、 疾病治疗等方 面都具有非常广泛的应用， 自体干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞， 在一定条 件下， 它可以分化成多种APS C多能细胞， 是一类具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞， 自体干细胞是一种未充分分化尚不成熟的细胞， 具有再生各种组织器官和人体的潜在功 能， 当遭遇疾病， 某一器官罢工或受伤 时， 自体干细胞会第一时间作出反应， 促进分化成身 体所需的专属细胞， 从而提供足够数量的专属细胞帮助修复和愈合， 改变了人类疾病的应 对方法， 医学界称为 “万用细胞 ”。 [0003]随着人们对美 的追求， 医疗美容技术的日臻完美， 自体脂肪间充质干细胞越来越 多应用于临床， 因此对自体脂肪间充质干细胞的临床前安全性评价尤为重要， 需要建立一 套成熟的方法用来测定人细胞  (不限于自体脂肪间充质干细胞)在动物体内的组织分布。 因此本发明特提出一种测定人体细胞在动物体内分布的方法以解决上述背景技术中所提 出的问题。 发明内容 [0004]本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点， 而提出的一种测定人体细胞在 动物体内分布的方法。 [0005]为了实现上述目的， 本发明采用了如下技 术方案： [0006]一种测定人体细胞在动物体内分布的方法， 所述测定方法具体包括如下步骤： [0007]S1： 取空白动物(比如食蟹猴)的组织匀浆液(比如肝)作为稀释液， 将受试物人体 细胞(比如组织间充质干细胞)稀释成不同浓度的标准曲线样本； [0008]S2： 使用提取试剂盒对标准曲线样本进行DNA提取， 以提取后  DNA为模板， 使用基 于人科动物特异性基因US P6设计的引物探针进行荧 光定量PCR； [0009]S3： 不同浓度标准曲线样本进行PCR得到各自不同的Ct值， 使用仪器系统软件以标 准曲线样本中人体细胞浓度对数值 为横坐标， Ct  值为纵坐标， 绘制标准曲线； [0010]S4： 将未知浓度样本采用与标准曲线样本相同的方法进行组织匀浆、 提取DNA,进 行qPCR获得未知浓度样本的Ct值， 再将Ct值代入标准曲线中即得 未知样本的浓度。 [0011]优选的， 所述步骤S1中组织匀浆液的制备具体步骤包括： 取空白食蟹猴的脑、 心、 肝、 脾、 肺、 肾等组织， 经高通 量组织研磨器 研磨得到匀浆液。 [0012]优选地， 所述受试物重悬液的制备步骤具体包括： 将受试物人体细胞融化、 计数后说　明　书 1/5 页 3 CN 115044679 A 3