(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221026948 8.2 (22)申请日 2022.03.18 (71)申请人 北京市农林科 学院 地址 100097 北京市海淀区曙光 花园中路 11号 (72)发明人 张建　温常龙　杨静静　张晓飞　 夏昌选　赵泓　郭凌　周蒙蒙　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 闫书宁 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定待测甜瓜品种为薄皮甜瓜还是厚 皮甜瓜的方法及其专用SNP引物组合 (57)摘要 本发明公开了一种鉴定待测甜瓜品种为薄 皮甜瓜还是厚皮甜瓜的方法及其专用SNP引物组 合。 SNP引物组合由2个引物组组成。 每个引物组 由3条引物序列组成， 用于扩增一个SNP位点。 2 个 引物组中各个引物的核苷酸序列依次如序列表 中序列1至序列6所示。 本发明提供的SNP引物组 合可用于鉴定待测甜瓜品种为薄皮甜瓜还是厚 皮甜瓜， 对农业生产和品种选育过程中明确甜瓜 的种群属性具有重要的应用价值。 本发明提供的 方法具有高通量、 准确、 低成本、 操作简单、 节约 人力、 物力等有点， 具有十分广阔的应用前 景。 权利要求书2页 说明书13页 序列表2页 附图4页 CN 114480721 A 2022.05.13 CN 114480721 A 1.SNP引物组合， 包括用于扩增甜瓜基因组的SNP05位点的引物组1和/或用于扩增甜瓜 基因组的SNP28位 点的引物组2； SNP05位点为1号染色体上的第3 3254142位核苷酸； SNP28位点为11号染色体上的第25 077228位核苷酸； SNP05位点和SNP28位点在染色体上的位置是基于甜瓜DHL92参考基因组序列比对确定 的， 甜瓜DHL9 2参考基因组序列的版本号 为V3.5.1。 2.根据权利要求1所述的SNP引物组合， 其特征在于： 所述SNP引物组合由所述引物组1 和/或所述引物组2组成。 3.根据权利要求1所述的SNP引物组合， 其特 征在于： 所述引物组1由SEQ  ID NO： 1所示的正向引物1F1、 SEQ  ID NO： 2所示的正向引物1F2和 SEQ ID NO： 3所示的反向引物1 R组成； 所述引物组2由SEQ  ID NO： 4所示的正向引物2F1、 SEQ  ID NO： 5所示的正向引物2F2和 SEQ ID NO： 6所示的反向引物 2R组成。 4.根据权利要求1所述的SNP引物组合， 其特 征在于： 所述引物组1由SEQ  ID NO： 1自5’末端起第22至43位所示的正向引物1F1、 SEQ  ID NO： 2 自5’末端起第2 2至44位所示的正向引物1F2和SEQ  ID NO： 3所示的反向引物1 R组成； 所述引物组2由SEQ  ID NO： 4自5’末端起第22至41位所示的正向引物2F1、 SEQ  ID NO： 5 自5’末端起第2 2至42位所示的正向引物 2F2和SEQ ID NO： 6所示的反向引物 2R组成。 5.权利要求1至4任一所述的SNP引物 组合在制备用于鉴定待测甜瓜品种为薄皮甜瓜还 是厚皮甜瓜的试剂盒中的应用。 6.权利要求1至4任一所述的SNP引物 组合在鉴定待测甜瓜品种为薄皮甜瓜还是厚皮甜 瓜中的应用。 7.一种鉴定待测甜瓜品种为薄皮甜瓜还是厚皮甜瓜的方法， 包括如下步骤： 检测待测 甜瓜品种 基于SNP05位点和/或SNP28位点的基因型， 然后进行如下判断： 如果基于SNP05位 点的基因型为TT纯合型和/或基于SNP28位点的基因型为CC纯合型， 则待测甜瓜品种鉴定为 或疑似鉴定为薄皮甜瓜； 如果基于SNP05位点的基因型为GG纯合型和/或基于SNP28位点的 基因型为A A纯合型， 则待测甜瓜品种鉴定为或疑似鉴定为厚皮甜瓜； SNP05位点为1号染色体上的第3 3254142位核苷酸； SNP28位点为11号染色体上的第25 077228位核苷酸； SNP05位点和SNP28位点在染色体上的位置是基于甜瓜DHL92参考基因组序列比对确定 的， 甜瓜DHL9 2参考基因组序列的版本号 为V3.5.1。 8.根据权利 要求7所述的方法， 其特征在于： 所述检测待测甜瓜品种基于SNP05位点和/ 或SNP28位 点的基因型的步骤如下： (1)以待测甜瓜品种的基因组DNA为模板， 采用权利 要求3中所述引物组1和/或引物组2 进行PCR扩增， 得到PCR扩增产物； (2)完成步骤(1)后， 采用仪器检测 PCR扩增产物的荧光信号， 根据荧光信号的颜色获得 待测甜瓜品种基于SNP0 5位点和/或SNP28位 点的基因型。 9.根据权利 要求7所述的方法， 其特征在于： 所述检测待测甜瓜品种基于SNP05位点和/ 或SNP28位 点的基因型的步骤如下：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114480721 A 2(1)以待测甜瓜品种的基因组DNA为模板， 采用权利 要求4中所述引物组1和/或引物组2 进行PCR扩增， 得到PCR扩增产物； (2)取步骤(1)得到的PCR扩增产物， 测序； (3)根据步骤(2)得到的测序结果， 获得待测甜瓜品种基于SNP05位点和/或SNP28位点 的基因型。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114480721 A 3