(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210277125.3 (22)申请日 2022.03.21 (71)申请人 南华大学附属南 华医院 地址 421000 湖南省衡阳市珠晖区东 风南 路336号 (72)发明人 何军　邓仲良　胡海洋　胡茜盼　 苏晓玲　 (74)专利代理 机构 北京轻创知识产权代理有限 公司 11212 专利代理师 何佩英 (51)Int.Cl. C12M 1/34(2006.01) C12M 1/36(2006.01) C12M 1/38(2006.01) C12Q 1/689(2018.01)C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/35(2006.01) (54)发明名称 一种肺炎支 原体检测装置及检测方法 (57)摘要 本发明涉及基因工程技术领域， 提供一种肺 炎支原体检测装置及检测方法， 包括外壳、 进出 样模块、 反应容器、 供料模块、 加热模块、 荧光检 测模块和控制模块， 利用本申请实施例所提供的 检测装置， 可以将扩增产物与LbCas12a ‑gRNA复 合物混合并进行扩增循环， 若存在荧光效应判 断， 则样本中存在肺炎支原体。 该方法可在短时 间内完成肺炎支原体的检测， 仅较 短时间即可检 测是否存在 肺炎支原体序列。 此装置可以便于携 带和保存， 能满足快速 检测的需要。 权利要求书2页 说明书6页 序列表2页 附图1页 CN 114574344 A 2022.06.03 CN 114574344 A 1.一种肺炎支原体检测装置， 其特征在于， 包括外壳(1)、 进出样模块(2)、 反应容器 (3)、 供料模块(4)、 加热模块(5)、 荧 光检测模块(6)和控制模块(7)， 其中： 所述进出样模块(2)、 所述反应容器(3)、 所述供料模块(4)、 所述加热模块(5)、 所述荧 光检测模块(6)和所述控制模块(7)均设置于所述外壳(1)内， 所述反应容器(3)具备加热腔 (31)， 所述供料模块(4)的供料泵(40)伸入所述加热腔(31)内， 所述加热腔(31)的进出样开 口(310)设置于所述外壳(1)上， 所述进出样模块(2)能够通过所述进出样开口(310)进入并 放置于所述加热腔(31)内， 所述反应容器(3)的外壁与所述加热模块(5)相互贴合； 所述进出样模块(2)包括多个反应管(20)， 所述反应容器(3)的外壁(30)及 所述反应管 (20)均由透明材 料制成； 所述供料模块(4)通过供料泵(40)为所述进出样模块(2)加料， 所述荧光检测模块(6) 正对所述反应容器(3)及所述进出样模块(2)； 所述控制模块(7)与所述供料模块(4)、 所述加热模块(5)、 所述荧光检测模块(6)均相 连。 2.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置， 其特征在于， 所述加热模块(5)至少具备 35℃和37℃两个恒温 温度。 3.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置， 其特征在于， 所述供料泵(40)包括中空 的 伸缩臂(400)和泵体(401)， 所述伸缩臂(400)通过所述泵体(401)与所述供料模块(4)的储 藏罐(41)相连， 所述泵体(401)用于通过 所述伸缩臂(40 0)将药剂从储藏罐(41)内泵出。 4.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置， 其特征在于， 所述供料模块(4)至少用于 分步添加所述 正向引物、 所述反向引物和所述 LbCas12a ‑gRNA复合物。 5.如权利要求1所述的肺炎支原体检测装置， 其特征在于， 所述反应容器(3)还包括保 护盖(32)， 所述保护盖(32)与所述加热腔(31)形状 配合并能够封闭所述进出样开口(310)。 6.一种利用如权利要求1至5任一所述的肺炎支原体检测装置进行肺炎支原体检测方 法， 其特征在于， 包括下列步骤： 在所述进出样模块(2)内通过ERA扩增样本序列， 所述样本序列包括靶序列或目的序 列， 得到扩增产物； 选取gRNA序列， 基于所述gRNA序列制备LbCas12a ‑gRNA复合物， 所述LbCas12a ‑gRNA复 合物包含荧光探针； 通过所述供料模块(4)向所述进出样模块(2)内添加所述LbCas12a ‑gRNA复合物， 在所 述进出样模块(2)内将所述扩增产物与所述LbCas12a ‑gRNA复合物混合并进行扩增循环， 若 所述荧光检测模块(6)判断存在荧 光效应， 则判断所述样本中存在肺炎支 原体。 7.如权利要求6所述的肺炎支 原体检测方法， 其特 征在于， 所述ERA扩增样本序列包括： 选取正向引物和反向引物， 通过ERA扩增所述样本序列， 所述正向引物的序列至少如 SEQ ID No.3或SEQ  ID No.4任一所示， 所述反向引物的序列至少如SEQ  ID No.5或SEQ  ID  No.6任一所示。 8.如权利要求6所述的肺炎支 原体检测方法， 其特 征在于， 所述gRNA的序列为多个。 9.如权利 要求8所述的肺炎支原体检测方法， 其特征在于， 所述gRNA序列至少 如SEQ ID  No.1或SEQ ID No.2任一所示。 10.如权利要求6所述的肺炎支原体检测方法， 其特征在于， 所述基于所述gRNA序列制权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114574344 A 2备LbCas12a ‑gRNA复合物包括： 将150nM的LbCas12a与6 0nM的所述gRNA在5 ×NEBuffer 2.1中37℃预孵 育10分钟； 以300nM的终浓度加入F ‑Q探针， 即得到所述 LbCas12a ‑gRNA复合物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114574344 A 3