(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210282537.6 (22)申请日 2022.03.22 (66)本国优先权数据 202110703223.4 2021.0 6.24 CN (71)申请人 扬州大学 地址 225009 江苏省扬州市大 学南路88号 (72)发明人 徐扬　焦宇馨　李成　于广宁　 周恺　杨文艳　王欣　杨泽峰　 徐辰武　 (74)专利代理 机构 上海怡恩专利代理事务所 (普通合伙) 31336 专利代理师 牟俊玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 玉米糯性基因的KASP分子标记的开发方法 及应用 (57)摘要 本发明公开了玉米糯性基因的KASP分子标 记的开发方法及应用， 属于生物技术领域。 它包 括KASP通过荧光探针特异性识别基因位点达到 基因分型的效果， 可用于检测SNP位点和InDel位 点。 与SSR、 RFLP、 InDel等分子标记相比， KASP标 记具有检测快速， 成本低， 易于规模化应用等特 点， KASP标记不需要 根据DNA片段大小进行分型， 能够摆脱传统凝胶电泳这种步骤相对繁琐， 低通 量， 价格又较贵的检测方法， 更加适用于现阶段 飞速发展的高通量分子检测平台。 因此， 开发低 成本、 适合于高通量分子检测平台的玉米糯性基 因KASP分子标记对于推广普及分子标记技术的 应用、 提高我国糯玉米的育种效率和育种水平具 有重要意 义。 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图1页 CN 114606336 A 2022.06.10 CN 114606336 A 1.玉米糯性基因的KASP分子标记开发方法， 其特征在于： 包括检测待测玉米的基因型， 根据待测玉米的基因型鉴定或辅助鉴定玉米糯性； 所述待测玉米的基因型为玉米基因组中 KASP_zmwx位点的基因型； 所述KASP_zmwx位点是玉米基因组中的一个InDel位点， 位于玉米 9号染色体25128934 ‑25128963位， 为SEQ  ID No.4的第51 ‑80位核苷酸， 其核苷酸种类为 GCGTTGTTCAGTTCAGAGAAGGCAACCTTT （下文均用 “+”表示） 或缺失 （下文均用 “‑”表示） ； KASP_zmwx位点的基因型为++基因型或+ ‑基因型， 待测玉米的糯性低于或者候选低于 KASP_zmwx位点的基因型为 ‑‑基因型的待测玉米； KASP_zmwx位点的基因型为 +‑基因型的待 测玉米与KASP_z mwx位点的基因型为 ++基因型的待测玉米在糯性上无显著差异； 其中， ++基 因型表示玉米基因组中所述KASP_zmwx位点的核苷 酸种类为 +的纯合型； ‑‑基因型表 示玉米 基因组中KASP_zmwx位点的核苷酸种类为 ‑的纯合型； + ‑基因型表示玉米基因组中KASP_ zmwx位点的核苷酸种类为+和 ‑的杂合型。 2.根据权利要求1所述的玉米糯性基因的KASP分子标记的开发方法而提出的应用， 其 特征在于， 所述应用包括以下几个方面： S1、 KASP_zmwx位 点的多态性或基因型的物质在鉴定或辅助鉴定玉米 糯性中的应用； S2、 KASP_zmwx位点的多态性或基因型的物质在制 备鉴定或辅助制备鉴定玉米糯性产 品中的应用； S3、 KASP_zmwx位点的多态性或基因型的物质在玉米辅助育种或制备玉米辅助育种产 品中的应用。 3.根据权利要求1所述的玉米糯性基因 的KASP分子标记的开发方法而提出玉米育种的 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 选择所述KASP_zmwx位点的基因型为 ‑‑的玉米作为亲本进行育种， ‑‑基因型表示玉米 基因组中KASP_zmwx位 点的核苷酸种类为 ‑的纯合型； 玉米育种为培 育高糯性玉米。 4.根据权利要求1所述的玉米糯性基因的KASP分子标记的开发方法而生产出的产品， 其特征在于， 主 要包括以下几种产品： s1、 检测与玉米 糯性相关的单核苷酸多态性或基因型的产品； s2、 鉴定或辅助鉴定玉米 糯性的产品； s3、 用于玉米辅助育种的产品。 5.根据权利要求2任一一项所述玉米糯性基因的KASP分子标记的开发方法而提出的应 用或权利要求7所述玉米糯性基因的KASP分子标记的开发方法而生产出的产品， 其特征在 于： 检测权利要求1中KAS P_zmwx位 点的多态性或基因型的物质为如下D1） 、 D2） 或D3） ： D1） 所述检测权利 要求1中KASP_zmwx位点的多态性或基因型的物质含有扩增包括所述 KASP_zmwx位 点在内的玉米 基因组DNA片段的PCR引物； D2） 所述检测权利要求1中KASP_zmwx位点的多态性或基因型的物质为含有所述PCR引 物的PCR试剂； D3） 含有D1） 所述PCR引物或D2） 所述PCR试剂的试剂盒。 6.根据权利要求5所述的应用或产品， 其特征在于： 所述PCR引物为由核苷酸序列是序 列表中SEQ  ID No.1的第22 ‑39位的单链DNA、 核苷酸序列 是序列表中SEQ  ID No.2的第22 ‑ 37位的单链DNA和核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.3的单链DNA组成的引物组。 7.根据权利要求5或6任意一种所述的应用或产品， 其特征在于： 所述PCR引物为由序列权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114606336 A 2表中SEQ ID No.1所示的单链DNA、 序列表中SEQ  ID No.2所示的单链DNA和由序列表中SEQ   ID No.3所示的单链DNA的引物组。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114606336 A 3