(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210282536.1 (22)申请日 2022.03.22 (66)本国优先权数据 202110690760.X 2021.0 6.22 CN (71)申请人 扬州大学 地址 225009 江苏省扬州市大 学南路88号 (72)发明人 徐扬　周恺　李成　杨文艳　 焦宇馨　薛钱承　于广宁　杨泽峰　 徐辰武　 (74)专利代理 机构 上海怡恩专利代理事务所 (普通合伙) 31336 专利代理师 牟俊玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 玉米抗甘蔗花叶病毒病基因的KASP分子标 记的开发及应用 (57)摘要 本发明公开了玉米抗甘蔗花叶病毒病基因 的KASP分子标记的开发及应用， 属于生物技术领 域。 它包括检测待测玉米的基因型， 根据待测玉 米的基因型鉴定或辅助鉴定玉米抗甘蔗花叶病 毒病； 所述基因型为玉米基因组中KASP_scmv位 点的基因型； 所述KASP_scmv位点是玉米基因组 中的一个InDel位点。 本发明中分子标记是与玉 米抗甘蔗花叶病毒病基因SCMV2紧密连锁的KASP 标记KASP_scmv， 该标记基于KASP技术开发， 可高 通量检测玉米基因组3号染色体的第129376861 位碱基， 本发明应用KASP技术对玉米抗甘蔗花叶 病毒病基因SCMV2进行基因型鉴定， 具有操作简 便、 成本低廉、 检测周期短、 标记稳定、 绿色环保 等优点， 可精 准检测玉米抗甘蔗花叶病毒病基因 SCMV2， 对促进玉米抗甘蔗花叶病毒病育种具有 重要意义。 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图1页 CN 114606335 A 2022.06.10 CN 114606335 A 1.玉米抗甘蔗花叶病毒病基因的KASP分子标记 的开发， 其特征在于： 包括检测待测玉 米的基因型， 根据待测玉米的基因型鉴定或辅助鉴定玉米抗甘蔗花叶病毒病； 所述基因型 为玉米基因组中KASP_scmv位点的基因型； 所述KASP_scmv位点是玉米基因组中的一个 InDel位点， 位于玉米3号染色体129376861位， 为SEQ  ID No.4的第51 ‑59位核苷酸， 其核苷 酸种类为CGTCGCAGC （下文均用 “+”表示） 或缺失 （下文均用 “‑”表示） ； 所述KASP_scmv位点的基因型为++基因型或+ ‑基因型的待测玉米的抗甘蔗花叶病毒病 高于或者候选高于所述KASP_scmv位点的基因型为 ‑‑基因型的待测玉米； 所述KASP_ scmv位 点的基因型为 +‑基因型的待测玉米与所述KASP_ scmv位点的基因型为 ++基因型的待测玉米 在抗甘蔗花叶病毒病上无显著差异； 其中， 所述 ++基因型表 示玉米基因组中所述KASP_ scmv 位点的核苷 酸种类为 +的纯合型； 所述 ‑‑基因型表 示玉米基因组中所述KASP_ scmv位点的核 苷酸种类为 ‑的纯合型； 所述 +‑基因型表 示玉米基因组中所述KASP_ scmv位点的核苷 酸种类 为+和‑的杂合型。 2.根据权利要求1所述的玉米抗甘蔗花叶病 毒病基因的KASP分子标记， 其特征在于： 本 分子标记在玉米育种中的应用。 3.根据权利要求1所述的玉米抗甘蔗花叶病 毒病基因的KASP分子标记， 其特征在于： 本 分子标记在检测 权利要求1中所述KASP_scmv位点的多态性或基因型的物质在鉴定或辅助 鉴定玉米抗甘蔗花叶病毒病中的应用。 4.根据权利要求1所述的玉米抗甘蔗花叶病 毒病基因的KASP分子标记， 其特征在于： 本 分子标记在检测 权利要求1中所述KASP_scmv位点的多态性或基因型的物质在制备鉴定或 辅助鉴定玉米抗甘蔗花叶病毒病产品中的应用。 5.根据权利要求1所述的玉米抗甘蔗花叶病 毒病基因的KASP分子标记， 其特征在于： 本 分子标记在检测 权利要求1中所述KASP_scmv位点的多态性或基因型的物质在玉米辅助育 种或制备玉米辅助育种产品中的应用。 6.根据权利要求2所述的玉米抗甘蔗花叶病 毒病基因 的KASP分子标记应用在玉米育种 而提出的育种方法， 其特 征在于： 包括以下步骤， 包括选择权利 要求1中所述KASP_scmv位点的基因型为 ‑‑的玉米作为亲本进行育种， 所 述‑‑基因型表 示玉米基因组中所述KASP_ scmv位点的核苷 酸种类为 ‑的纯合型； 所述玉米育 种可为培 育抗甘蔗花叶病毒病玉米。 7.根据权利要求1所述的玉米抗甘蔗花叶病 毒病基因的KASP分子标记， 其特征在于： 该 分子标记还应用在检测权利要求 1中所述KASP_sc mv位点的多态 性或基因型的物质的产品， 该产品包括以下C1） ‑C3） 中任一种产品； C1） 检测与玉米抗甘蔗花叶病毒病相关的I nDel多态性或基因型的产品； C2） 鉴定或辅助鉴定玉米抗甘蔗花叶病毒病的产品； C3） 用于玉米辅助育种的产品。 8.根据权利要求3 ‑5或7任意一项所述的玉米抗甘蔗花叶病毒病基因的KASP分子标记 的应用， 其特征在于： 所述检测权利要求1中KASP_scmv位点的多态性或基因型的物质为如 下D1） 、 D2） 或D3） ； D1） 所述检测权利 要求1中KASP_scmv位点的多态性或基因型的物质含有扩增包括所述 KASP_scmv位 点在内的玉米 基因组DNA片段的PCR引物；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114606335 A 2D2） 所述检测权利要求1中KASP_scmv位点的多态性或基因型的物质为含有所述PCR引 物的PCR试剂； D3） 含有D1） 所述PCR引物或D2） 所述PCR试剂的试剂盒。 9.根据权利要求8所述的玉米抗甘蔗花叶病毒病基因的KASP分子标记 的应用， 其特征 在于： 所述PCR引物为由核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.1的第22‑37位的单链DNA、 核苷 酸序列是序列表中SEQ  ID No.2的第22 ‑38位的单链DNA和核苷酸序列是序列表中SEQ  ID  No.3的单链DNA组成的引物组。 10.根据权利要求9任意一项所述的玉米抗甘蔗花叶病毒病基因的KASP分子标记的应 用， 其特征在于： 所述PCR引物为由序列表中SEQ  ID No.1所示的单链DNA、 序列表中SEQ  ID  No.2所示的单链DNA和由序列表中SEQ  ID No.3所示的单链DNA的引物组。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114606335 A 3