(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210283231.2 (22)申请日 2022.03.22 (71)申请人 海南大学三亚南繁研究院 地址 572024 海南省三 亚市崖州区甘农大 道海南大 学三亚南繁研究院 (72)发明人 夏志辉　任小青　苗哲宁　冀占东　 刘士饶　杨小锋　 (74)专利代理 机构 成都知棋知识产权代理事务 所(普通合伙) 51325 专利代理师 马晓静 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/02(2006.01) (54)发明名称 一种用于功能标记检测水稻香味基因badh2 的引物及试剂盒和方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于功能标记检测水稻 香味基因badh2 的引物及试剂盒和方法， 四引物 PCR扩增体系中， 引物对 的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.3、 SEQ  ID NO.4、 SEQ  ID NO.7、 SEQ  ID NO.8 所示； 所述badh2基因为水稻香味基因； 所述 Badh2基因为水稻非香基因。 本发明针对ba dh2基 因第七外显子突变类型的检测标记还存在操作 复杂、 成本高的缺点， 为了能更快的、 更有效的将 香味基因badh2应用到水稻品质育种项目中， 本 发明提供了一种香味基因ba dh2的功能标记的开 发方法， 利用该方法设计的功能标记能提高 badh2基因在分子标记辅助选择育种的准确性及 降低检测费用。 权利要求书2页 说明书6页 序列表2页 附图1页 CN 114561486 A 2022.05.31 CN 114561486 A 1.一种用于功能标记检测badh2和Badh2基因的引物对， 其特征在于， 四引物PCR扩增体 系中， 引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3、 SEQ ID NO.4、 SEQ ID NO.7、 SEQ ID NO.8所示； 或， 两引物PCR扩增体系中， 引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3、 SEQ  ID NO.4所示， 及SEQ   ID NO.3、 SEQ ID NO.5所示， 及SEQ  ID NO.4、 SEQ ID NO.6所示； 其中， 所述badh2基因为水稻香味基因； 所述Badh2基因为水稻非香基因。 2.一种用于功能标记检测badh2和Badh2基因的试剂盒， 其特征在于， 该试剂盒中的引 物为如权利要求1所述的用于功能标记检测badh2和Badh2基因的引物对。 3.一种如权利要求1所述的用于功能标记检测badh2和Badh2基因的引物对 的应用， 其 特征在于， 该应用为以下任意 一种： (1)用于鉴定或筛 选含有香味基因badh2或非香基因Badh2的水稻； (2)用于分子标记辅助选择育种。 4.一种用于功能标记检测badh2和Badh2基因的方法， 其特 征在于， 该 方法包含： 利用核苷酸序列如SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.7、 SEQ  ID No.8所示的引物 对待检测的水稻品种的基因 组DNA进行PCR， 根据结果判断： 若有两条PCR产物且大小为 441bp、 204bp， 则检测水稻中含有纯合 香味基因badh2； 若有两条PCR产物且大小为 441bp、 288bp， 则检测水稻中含有纯合非香基因Badh2； 若有三条PCR产物且大小为 441bp、 204bp、 28 8bp， 则检测水稻中含有杂合基因； 或， 该方法包含： 利用核苷酸序列如SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.4所示的引物对待检测的水稻品种的基因 组DNA进行PCR， 若扩增产物的大小为 440bp， 则PCR体系正常； 再利用核苷酸序列如SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.5所示引物或如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID  No.6所示引物对待检测的水稻品种的基因 组DNA进行PCR， 根据结果判断： 若核苷酸序列如SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.5所示引物扩增的产物的大小为204bp， 且核 苷酸序列如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.6所示引物无扩增产物， 则检测水稻中携有纯合香味 基因badh2； 若核苷酸序列如SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.5所示引物无扩增产物， 且核苷酸序列如SEQ   ID No.4、 SEQ  ID No.6所示引物扩增的产物的大小为288bp， 则检测水稻中含有纯合非香基 因Badh2； 若核苷酸序列如SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.5所示引物扩增的产物的大小为204bp， 且核 苷酸序列如SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.6所示引物扩增的产物的大小为288bp， 则检测水稻中 含有杂合基因。 5.一种对非香水稻品种的改良方法， 其特 征在于， 该 方法包含： 以含有香味badh2基因的水稻材料为父本， 以待改良的纯合非香基因Badh2水稻 为轮回 母本进行杂交， 利用SEQ  ID No.3、 SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.7、 SEQ  ID No.8引物组成的PCR 体系进行检测， 从中选出有PCR产物且大小为441bp、 204bp、 288bp的植株为父本， 与轮回亲 本进行进一 步杂交； 待轮回后代农艺性状基本与轮回亲本一致后， 再自交套袋收种， 再用利用SEQ  ID  No.3、 SEQ  ID No.4、 SEQ  ID No.7、 SEQ  ID No.8引物体系对后代进行检测， 从中选出有PCR权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114561486 A 2产物且大小为 441bp、 204bp的植株， 获得含有香味基因Badh2纯合 植株。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114561486 A 3