(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210280493.3 (22)申请日 2022.03.22 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114574500 A (43)申请公布日 2022.06.03 (73)专利权人 中国农业科 学院深圳农业基因 组 研究所 地址 518124 广东省深圳市大鹏新区鹏飞 路7号 (72)发明人 向勇　赵波　徐建龙　张会　陈凯　 刘瑞芳　朱双兵　 (74)专利代理 机构 北京蕙识同联专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11966 专利代理师 赵雪(51)Int.Cl. C12N 15/29(2006.01) C12N 15/113(2010.01) C07K 14/415(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 103613649 A,2014.0 3.05 CN 113957082 A,202 2.01.21 审查员 赵二双 (54)发明名称 水稻剑叶鞘及穗部 白化性状基因OsWSSP的 克隆及应用 (57)摘要 本申请涉及水稻剑叶鞘及穗部白化性状基 因OsWSSP的克隆及应用。 本申请首次发现， OsWSSP的启动子发生倒位突变导致该基因编码 蛋白的表达量降低， 从而引起水稻剑叶鞘及穗部 出现白化表型。 同时， 本申请还开发并验证了与 目标基因OsWSSP紧密连锁的分子标记， 以用于不 同水稻品系及其 衍生的杂交种的筛 选标记。 权利要求书1页 说明书8页 序列表11页 附图3页 CN 114574500 B 2022.11.22 CN 114574500 B 1.一种OsWSSP基因， 其核酸序列如SEQ  ID.NO.1所示或SEQ  ID.NO.2所示。 2.一种启动子， 其核酸序列如SEQ  ID.NO.5所示或SEQ  ID.NO.6所示。 3.权利要求1所述的基因在调控水稻剑叶鞘和穗部的叶绿体发育和/或叶绿素合成中 的应用。 4.一种引物组， 其特 征在于， 所述引物组至少包 含如下2个引物对： 第1对引物， 上游引物序列如SEQ  ID.NO.7所示， 下游引物序列如SEQ  ID.NO.8所示； 第2对引物， 上游引物序列如SEQ  ID.NO.9所示， 下游引物序列如SEQ  ID.NO.10所示。 5.一种引物组， 其特 征在于， 所述引物组至少含有如下4个引物对： 第1对引物， 上游引物序列如SEQ  ID.NO.11所示， 下游引物序列如SEQ  ID.NO.12所示； 第2对引物， 上游引物序列如SEQ  ID.NO.13所示， 下游引物序列如SEQ  ID.NO.14所示； 第3对引物， 上游引物序列如SEQ  ID.NO.15所示， 下游引物序列如SEQ  ID.NO.16所示； 第4对引物， 上游引物序列如SEQ  ID.NO.17 所示， 下游引物序列如SEQ  ID.NO.18所示。 6.一种试剂盒， 其特征在于： 包含权利要求1所述的基因， 和/或权利要求2所述的启动 子， 和/或权利要求 4或5所述的引物组。 7.一种水稻品种的鉴定方法， 包括鉴定水稻基因组中的如权利要求1所述的基因， 和/ 或权利要求2所述的启动子， 包括以下步骤： （1） 提取水稻样品基因组DNA； （2） 利用权利要求 4或5所述的引物组对所述基因 组DNA进行PCR扩增； （3） 分析 所述扩增后的产物大小。 8.权利要求1所述的基因、 或权利要求2所述的启动子、 或权利要求4或5所述的引物 组、 或权利要求6所述的试剂盒、 或权利要求7所述的方法在鉴定水稻品种或在水稻育种中的用 途。 9.如权利要求3所述的应用， 或如权利要求7所述的方法， 或如权利要求8所述的用途， 其特征在于， 所述水稻包括黄华占、 日本晴、 光敏或 温敏不育系。 10.如权利要求9所述的应用、 方法或用途， 其特征在于， 所述水稻具有剑叶鞘及穗部白 化表型。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114574500 B 2水稻剑叶鞘及穗部白化性状基因OsWS SP的克隆及应用 技术领域 [0001]本申请涉及水稻剑叶鞘及穗部白化性状基因OsWSSP的克隆及应用， 属于分子生物 学技术领域。 背景技术 [0002]水稻是我国重要的粮食作物之一。 水稻光合效率关乎稻谷产量， 而光合效率与叶 绿体的发育及光合色素 的含量密切相关。 因此， 深入解析水稻绿色组织中叶绿体发育的分 子机制， 对水稻光合效率的提升具有重要意义。 水稻中相关研究主要集中在叶片的叶绿体 发育调控方面， 而其穗部及剑叶鞘叶绿体发育及其光合效率， 对稻谷产量的影响研究较为 匮乏。 [0003]目前， 水稻 中相关研究主要集中在叶片的叶绿体发育调控方面， 人们已利用叶色 突变作为两系杂交水稻不育系和杂交种纯种筛选标记， 但淡绿色和浅黄色的叶子很难区 分， 这使得叶色突变作为筛选工具的效率很低。 因此， 如果能够找到影响水稻穗及剑叶鞘白 化的相关基因， 将不仅利于深化水稻叶绿体发育的分子机制 研究， 同时有助于拓展穗轴及 叶鞘白化调控基因在水稻杂交育种中的应用研究。 [0004]另外， 在品种鉴定中， 田间种植鉴定虽具有适用范围广泛、 鉴定结果可靠等优点， 但该方法时间长、 效率低、 工作量大、 结果滞后。 一般而言， 所需鉴定目标性状大多为数量性 状， 受环境影响较大， 需要具有一定 田间检验经验的人员才能保证检测准确性， 而DNA指纹 图谱技术则具有高效、 准确、 实验操作简单、 不受环境影响等优点， 已广泛应用于植物品种 真实性鉴定及纯度检测研究。 [0005]已知比较成熟、 应用比较广泛的DNA指纹图谱技术包括RAPD、 ISSR、 InDel等， 这些 技术各有优势。 InDel是指在近缘种或同一物种不同个体之间基因组同一位点的序列发生 不同大小核苷酸片段的插入或缺失(insertion ‑deletion)， 是同源序列比对产生空位 (gap)的现象。 由于InDel分子标记具有数量丰富、 多态 性高、 精度高、 检测时间短、 技术成熟 等特点， 在植物品种 鉴定及纯度检测的方面具有广阔的应用前景。 然而， InDel产生主要与 基因组的特征和DNA复制错误有关， 大部分插入/缺失突变的产生机制现在仍旧未知。 由于 插入和删除的比例会因为测序错误而增加， 并且在这些测序错误区域， 真实InDel多态 性率 也增加， 因此， 对于在庞大的基因组测序数据中那些数以万计的插入和缺 失之处， 哪些位置 是操作问题、 哪些位置是测序错误、 哪些位置是真正的InDel变异 等问题为获得有效的分子 标记引物带来了挑战。 发明内容 [0006]本申请首次发现了一种控制水稻孕穗期剑叶鞘以及开花期以及种子灌浆期穗部 表现出明显白化表型的基因OsWSSP， 以及该基因的CDS编码的蛋白， 并进一步确定了该基因 或蛋白调控该表型的分子 机理。 [0007]其中， 发明人发现该基因的启动子出现倒位突变， 该突变导致目标蛋白表达量降说　明　书 1/8 页 3 CN 114574500 B 3