(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210293002.9 (22)申请日 2022.03.23 (71)申请人 中国科学院华南植物园 地址 510650 广东省广州市天河区兴科路 723号 (72)发明人 侯兴亮　刘旭　梅果果　李澍銓　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 刘明星　朱聪聪 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 甘薯小象甲抗性位点SPWR1、 SPWR2、 分子标 记及其应用 (57)摘要 本发明公开了甘薯小象甲抗性位点SPWR1、 SPWR2、 分子标记及其应用。 SPWR1、 SPWR2分别位 于甘薯基因组(参考甘薯品种泰中6号基因组)9 号染色体7.326 ‑7.462Mb和7号染色体30.23 ‑ 30.30Mb。 与SPWR1密连锁的分子 标记SPWR1a位于 甘薯基因组9号染色体的第73 72883bp位置， 其是 一个单核苷酸多态性(SNP)位点标记， 在抗性品 种中SNP基因型为C/C碱基纯合， 感性品种中为A / C碱基杂合， 与 SPWR2紧密连锁的SPWR2a位于甘薯 基因组7号染色体的第30306530bp位置， 其是一 个120bp的多核苷酸插入型(Indel)分子 标记， 在 抗性品种 中基因型为纯合， 感性品种为杂合。 本 发明提供甘薯小象甲抗性位点SPWR1、 SPWR2， 所 述抗性位点与甘薯小象 甲抗性表型关联密切， 有 利于辅助甘薯抗性筛选分子育种。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114622032 A 2022.06.14 CN 114622032 A 1.甘薯小象甲抗性位点SPWR1、 SPWR2， 其特征在于， SPWR1于甘薯基因组9号染色体有一 个紧密连锁的有效分子标记SPWR1 a， SPWR2于甘薯基因组7号 染色体有一个紧密连锁的有效 分子标记S PWR2a。 2.与权利要求1所述的甘薯小象甲抗性位点SPWR1、 SPWR2紧密连锁的分子标记SPWR1a 和SPWR2a， 其特征在于， 分子标记SPWR1a位于甘薯 基因组9号染色体的第7372883bp位置， 其 是一个单核苷酸多态性位点标记， 在抗性品种中SNP基因型为C/C碱基纯合， 感性品种中为 A/C碱基杂合， SPWR2a位于甘薯 基因组7号染色体的第30306530bp位置， 其是一个120bp的多 核苷酸插入型分子标记， 在抗性品种中基因型为纯合， 感性品种为杂合， 所述的120bp的多 核苷酸为TGCCAAA GACCTTGTGGTCAA GCGGCACCCGGTGTACACTACTTTGA GAAAGTAGCTATGAACA GATA CTACATTCTAACCGAGTCAGTAGA ACTCAAAAAAAAAAATTAAACTCTTATA。 3.一种鉴定权利要求2所述的分子标记SPWR1a、 SPWR2a的检测引 物组， 其特征在于， 所 述分子标记SPWR1a的检测引物为： F1引物： 5 ′ ‑CTCGATAGGAGCCCCGACAT； R1引物： 5 ′ ‑ GATACCTTGGAGTTTCTCAC； 所述分子标记SPWR2a的检测引物为： F2引物： 5 ′ ‑ CCAAGTAAGTCTATCTGA AG； R2引物： 5 ′ ‑GATCCAGACTGA ATGCCCACA。 4.权利要求2所述的分子标记SPWR1a、 SPWR2a或权利要求3所述的检测引物组在辅助甘 薯育种中或甘 薯抗性种质资源鉴定中的应用。 5.根据权利 要求4所述的应用， 其特征在于， 是利用分子标记SPWR1a和 SPWR2a或其检测 引物组辅助筛 选抗性甘薯材料。 6.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述的应用是在抗甘薯小象甲的甘薯品种 选育方法中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 利用分子标记SPWR1a和SPWR2a， 通过筛选 含有抗性位点SPWR1、 SPWR2位点的品种与不含抗性位点SPWR1、 SPWR2位点的品种作为亲本 进行杂交， 在表现优良农艺性状的杂交子代 中再次筛选含有抗性位点SPWR1、 SPWR2位点的 株系， 可获得 具备甘薯小象甲抗 性的优良农艺品系。 8.一种鉴定甘薯抗性位点SPWR1、 SPWR2基因型的方法， 其特征在于， 通过鉴定 品种中权 利要求2所述的分子标记S PWR1a、 SPWR2a的基因型， 判断抗 性位点SPWR1、 SPWR2的基因型。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特 征在于， 具体鉴定步骤如下： 分别利用权利要求3所述的分子标记SPWR1a、 SPWR2a的检测引 物组对待测甘薯样品基 因组DNA进行PCR扩增， 获得扩增产物； 对分子标记SPWR1a的扩增产物进行DNA测序， 判断是否有一个单核苷酸多态性位点标 记， 在抗性品种中SNP基因型为C/C碱基纯合， 感性品种中为A/C碱基杂合， 筛选带有抗性位 点的品系； 对分子标记SPWR2a的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳， 带有纯合抗性位点的PCR扩增产 物长度为83 5bp， 筛选带有抗 性位点的品系。 10.根据权利 要求9所述的方法， 其特征在于， 所述的PCR扩增， 其体系为10 μL， 包括： Taq   DNA Polymerase  Mix 5 μL、 DNA模板1μL、 上游引物和下游引物各0.5 μL和去离子水3 μL， PCR 扩增反应程序为98℃预变性3min； 98℃变性30sec； 55 ‑60℃退火30sec； 72℃延伸60 ‑90sec， 35个循环； 72℃延伸5mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114622032 A 2甘薯小象甲抗性位点SPWR1、 SPWR2、 分子标记及其应用 技术领域： [0001]本发明属于甘薯抗虫领域， 具体涉及两个甘薯小象甲抗性位点、 分子标记及其应 用。 背景技术： [0002]甘薯(Ipomoea  batatas L.)是种植面积广、 产量丰厚的一种重要作物， 其品种多 样、 用途广泛， 具有较高生产价值和农业地位。 甘薯主要产区集中在亚、 非洲， 其中热带和亚 热带甘薯产区极易爆发一种甘 薯小象甲(Cylas  formicarius  Fab.)灾害。 [0003]甘薯小象甲属于鞘翅目蚁象虫科昆虫， 是世界性检疫害虫， 也是甘薯生产中的一 种毁灭性害虫， 通常使甘薯减产20 ‑50％， 严重时甚至绝收。 甘薯小象甲成虫 啃食甘薯的嫩 芽梢、 茎蔓与叶柄的皮层， 并将块根咬食成许多小孔， 影响甘薯的生长发育和薯块的产量。 其幼虫钻蛀匿居于块根或薯蔓内， 不但能抑制块薯的发育膨大， 且其排泄物充塞于潜道中， 助长病原侵染， 导 致薯块腐烂霉坏、 变黑发臭， 严重影响薯块的品质和储藏。 [0004]近年来甘薯小象甲的频繁发生严重威胁着我国甘薯的种植。 目前甘薯小象甲的防 治仍以化学防治为主， 存在农药滥用、 环境污染和食品安全问题， 有效抗虫位点或分子标记 的缺乏导致甘薯 抗虫种质资源筛选十分 困难、 甘薯小象甲抗性分子育种进展缓慢。 因此， 挖 掘和筛选甘薯自身抗性资源、 抗性位点和分子标记对甘薯小象甲抗性品种的选育具有重要 意义。 发明内容： [0005]本发明的目的是为甘薯分子育种提供两个可用于检测甘薯小象甲抗性位点、 分子 标记及其应用， 为甘 薯抗虫评价和育种改良提供新的遗传位 点和可用的分子标记。 [0006]本发明为甘薯提供了可用于检测甘薯小象甲抗性的遗传位点SPWR1、 SPWR2， 定位 于甘薯基因组9号染色体7.326 ‑7.462Mb和7号染色体30.23 ‑30.30Mb(参考甘薯品种 泰中6 号基因组)。 所述两抗虫位点在抗性品种(本发明选用甘薯品种N73为示例)和感性品种(本 发明选用甘薯品种G87为示例)中存在多态性， 已在感性、 抗性亲本的杂交子代中验证抗性 位点在抗性材料存在且为纯合， 在感性材 料中为杂合。 [0007]本发明提供用于鉴定抗性位点SPWR1、 SPWR2位点的分子标记SPWR1a和SPWR2a， 分 子标记SPWR1a、 SPWR2a与对应的抗 性位点紧密连锁； [0008]所述的分子标记SPWR1a位于甘薯基因组9号染色体的第7372883bp位置， 其是一个 单核苷酸多态 性(SNP)位点标记， 在抗性品种中SNP基因型为C/C碱基纯合， 感性品种中为A/ C碱基杂合， 所述的SPWR2a位于甘薯基因组7号染色体的第30306530bp位置， 其是一个120bp 的多核苷酸插入型(Indel)分子标记， 在抗性品种中基因型为纯合， 感性品种为杂合， 所述 的120bp的多核苷酸为 “TGCCAAAGACCTTGTGGTCAAGCGGCACCCGGTGTACACTACTTTGAGAAAGTAGC TATGAACAGATACTACATTCTAACCGAGTCAGTAGAACTCAAAAAAAAAAATTAAACTCTTATA ”， 具体如SEQ   ID NO.1所示。说　明　书 1/5 页 3 CN 114622032 A 3