(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210293003.3 (22)申请日 2022.03.23 (71)申请人 杭州瑞普基因科技有限公司 地址 311100 浙江省杭州市余杭区五常街 道联创街18 8号贝达梦工场D座7-9层 (72)发明人 王涛　司慧娟　闫慧慧　马亚茹　 (74)专利代理 机构 北京卓孚律师事务所 1 1821 专利代理师 谢梦欣　宋明 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C40B 40/06(2006.01) (54)发明名称 循环游离DNA中肿瘤相关突变基因检测的参 考品 (57)摘要 本发明提供一种肿瘤相关突变基因检测技 术的参考品， 具体为一种用于血浆游离DNA突变 检测的参考品。 本发明还提供含有所述参考品的 参考品盘， 包含所述参考品或参考品盘的试剂 盒， 以及它 们的用途。 权利要求书3页 说明书22页 CN 114717314 A 2022.07.08 CN 114717314 A 1.用于循环 游离DNA突变 检测的参 考品， 其中， 所述 参考品中包 含： 野生型DNA片段， 和 一种或多种突变型DNA片段， 每种所述突变型DNA片段具有一种或多种碱基突变并且编 码的氨基酸序列具有表1中列出的一种或多种氨基酸 突变。 2.根据权利要求1所述的参考品， 其中， 所述参考品中的突变型DNA片段编码的氨基酸 序列包含选自如下(a)～(i)中任一组的氨基酸突变组合， 并且不含其他组的任何氨基酸突 变： (a)EGFR的氨基酸 突变p.E746_A75 0del， EGFR的氨基酸 突变p.T790 M， EGFR的氨基酸 突变p.L858R， KRAS的氨基酸 突变p.G12C； (b)EGFR的氨基酸 突变p.G719 A， EGFR的氨基酸 突变p.E746_A75 0del， NRAS的氨基酸 突变p.Q61K， KRAS的氨基酸 突变p.G12 V； (c)EGFR的氨基酸 突变p.G719S， ALK的氨基酸 突变EML4‑ALK， BRAF的氨基酸 突变p.V6 00E， KRAS的氨基酸 突变p.G12D， PIK3CA的氨基酸 突变p.H1047R； (d)EGFR的氨基酸 突变p.L747_P75 3 indel S， EGFR的氨基酸 突变p.S768I， KRAS的氨基酸 突变p.G13 C， ERBB2的氨基酸 突变p.A7 75_G776insYVMA； (e)EGFR的氨基酸 突变p.C797S， KRAS的氨基酸 突变p.G13D， PIK3CA的氨基酸 突变p.E545K； (f)KRAS的氨基酸 突变p.G12S， EGFR的氨基酸 突变p.L747_A75 0delinsP， PIK3CA的氨基酸 突变p.E542K； (g)ALK的氨基酸 突变EML4‑ALK， KRAS的氨基酸 突变p.G12 A； (h)KRAS的氨基酸 突变p.Q61H， EGFR的氨基酸 突变p.L861Q， MET的氨基酸 突变14exo n skipping； (i)EGFR的氨基酸 突变p.E746_S752del insV， EGFR的氨基酸 突变D770_N771insG， RET的氨基酸 突变KIF5B ‑RET， ROS1的氨基酸 突变CD74 ‑ROS1，权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114717314 A 2EGFR的氨基酸 突变p.G719C 。 3.根据权利要求1或2所述的参考品， 其中， 所述突变型DNA片段和野生型DNA片段具有 与cfDNA相似的长度， 例如具有13 0‑170bp的平均长度。 4.根据权利要求1～3 中任一项所述的参考品， 其中， 所述参考品中所述突变型DNA片段 和野生型DNA片段的比例 使得所述碱基突变的频率为0.1～10％， 优选为1～5％， 更优选为 约3％。 5.根据权利 要求2～4中任一项所述的参考品， 所述参考品包含选自如 下(a)～(i)中任 一组的碱基突变组合， 并且不含其 他组的任何碱基突变： (a)对应所述p.E746_A75 0del的碱基突变c.2 235_2249del15， 对应所述p.T790 M的碱基突变c.23 69C>T， 对应所述p.L858R的碱基突变c.2573T>G， 对应所述p.G12C的碱基突变c.34G>T； (b)对应所述p.G719 A的碱基突变c.215 6G>C， 对应所述p.E746_A75 0del的碱基突变c.2 236_2250del15， 对应所述p.Q61K的碱基突变c.181C>A， 对应所述p.G12 V的碱基突变c.3 5G>T； (c)对应所述p.G719S的碱基突变c.215 5G>A， 对应所述E ML4‑ALK的亚型E 6； A20， 对应所述p.V6 00E的碱基突变c.179 9T>A， 对应所述p.G12D的碱基突变c.3 5G>A， 对应所述p.H1047R的碱基突变c.3140A>G； (d)对应所述p.L747_P75 3 indel S的碱基突变c.2 240_2257del18， 对应所述p.S768I的碱基突变c.23 03G>T， 对应所述p.G13 C的碱基突变c.37G>T， 对应所述p.A7 75_G776insYVMA的碱基突变c.2324_2325i ns12； (e)对应所述p.C797S的碱基突变c.2389T>A， 对应所述p.G13D的碱基突变c.38G>A， 对应所述p.E 545K的碱基突变c.16 33G>A； (f)对应所述p.G12S的碱基突变c.34G>A， 对应所述p.L747_A75 0delinsP的碱基突变c.2 239_2248delinsC， 对应所述p.E 542K的碱基突变c.1624G>A； (g)对应所述E ML4‑ALK的亚型E13； A 20， 对应所述p.G12 A的碱基突变c.3 5G>C； (h)对应所述p.Q61H的碱基突变c.183A>T， 对应所述p.L861Q的碱基突变c.2582T>A， 对应所述14exo n skipping的碱基突变c.3 082+1G>T； (i)对应所述p.E746_S752del insV的碱基突变c.2 237_2255delinsT， 对应所述D7 70_N771insG的碱基突变c.2310_231 1insGGT， 对应所述KIF5B ‑RET的亚型 K15； R12，权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114717314 A 3