(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210289664.9 (22)申请日 2022.03.23 (71)申请人 福建医科 大学孟超肝胆医院 （福州 市传染病医院） 地址 350025 福建省福州市 鼓楼区西洪路 312号 (72)发明人 刘小龙　许海坡　汤优　曾永毅　 赵必星　蔡志雄　周阳　 (74)专利代理 机构 福州元创专利商标代理有限 公司 35100 专利代理师 林文弘　蔡学俊 (51)Int.Cl. C12Q 1/6893(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 对五种输入性疟原虫分型检测的引物、 探针 及方法 (57)摘要 本发明公开了一种对五种输入性疟原虫分 型检测的引物、 探针及方法。 所述五种输入性疟 原虫包括恶 性疟原虫、 间日疟原虫、 三日疟原虫、 卵形疟原虫和诺氏疟原虫， 所述引物包括8条引 物， 所述探针包括2条探针。 本发明基于多重PCR， 利用不对称扩增方法扩增出大量的带有特定标 签序列的长链单链DNA产物， 结合通用型二维标 记探针介导的熔解曲线分析技术， 实现单管/闭 管双通道的5种疟原虫快速检测及分型。 同时， 亦 可通过内标指示体系正常与否及标本采集质量。 检测体系5个检测对象检测下限均为10拷贝数/ 反应， 体系特异性好， 选择能力强。 该方法有助于 输入性疟原虫快速检测和分型， 对外防输入疟疾 和保持沿海经济持续发展具有重要意 义。 权利要求书2页 说明书7页 序列表4页 附图3页 CN 114540526 A 2022.05.27 CN 114540526 A 1.对五种输入性疟原虫分型检测的引物和探针， 其特征在于： 所述五种输入性疟原虫 包括恶性疟原虫、 间日疟原虫、 三日疟原虫、 卵形疟原虫和诺氏疟原虫， 所述引物包括8条引 物， 所述探针包括2条探针； 所述8条引物为： Pf‑R： 5’ ‑CCATTAGAACCCTTAAGCTACTC CACGGTACTGAAGGAAGCAATCTAAAAGTCA  ‑3’； Pv‑R： 5’ ‑CCATTACTTGCCTTATACTACTC CACCAATCTAAGAATAAACTCCGAAGAGAAAATT  ‑3’； Pm‑R： 5’ ‑CCATTACTACCCTTATACTACTC CACGGAAGCTATCTA AAAGAAACACTCATATATA AGAAT  ‑3’； Po‑R： 5’ ‑CCTATCTCT TAACCTCCACTGCTTTCACCAATCTAAGAAATTTCCCCRAAAGGAATT‑3’； Pk‑R： 5’ ‑CCTATCTCGTA ACCTCCACCCCTTTCACCTAAGAGTTCTAATCTCCGGAGAGAAAAGAA‑3’； F： 5’ ‑ACGATCAGATAC CGTCGTAATCTT  ‑3’； RNaseP‑R： 5’ ‑CCTATCTCTCA ACCTCCACCCCTTTCACTTGGGTGTGACCCTGAAGACTC‑3’， RNaseP‑F： 5’ ‑CCATCAACCACGCCATCAACAT‑3’； 所述2条探针为： U1： 5’ ‑CCATTACAACCCTTATACTACTC CAC‑3’； U2： 5’ ‑CCTATCTCTCA ACCTCCACCCCTTTCAC‑3’。 2.根据权利要求1所述的对五种输入性疟原虫分型检测的引物和探针， 其特征在于： 所 述2条探针为碱基淬灭或自身淬灭； 碱基淬灭的荧 光探针为： U1： 5’FAM‑CCATTACAACCCTTATACTACTC CAC‑P 3’； U2： 5’HEX‑CCTATCTCTCA ACCTCCACCCCTTTCAC‑P 3’； 自身淬灭的荧 光探针为： U1： 5’FAM‑CCATTACAACCCTTATACTACTC CAC‑BHQ1 3’； U2： 5’HEX‑CCTATCTCTCA ACCTCCACCCCTTTCAC‑BHQ1 3’。 3.如权利要求1所述的引物和探针在制备检测五种输入性疟原虫并分型的试剂 盒中的 用途； 其中， 所述 五种输入性疟原虫包括恶性疟原虫、 间日疟原虫、 三日疟原虫、 卵形疟原虫 和诺氏疟原虫。 4.一种用于检测五种输入性疟原虫并分型的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒包括权 利要求1所述的引物和探针； 所述五种输入性疟原虫包括恶性疟原虫、 间日疟原虫、 三日疟 原虫、 卵形疟原虫和诺氏疟原虫。 5.用于非疾病诊断治疗目的的五种输入性疟原虫的分型检测方法， 其特征在于： 所述 方法包括如下步骤： （1） 提取待测样本的DNA； （2） 使用如权利要求1中所述的引物和探针对步骤 （1） 获得的DNA进行荧 光定量PCR； （3） 获得并分析 熔解曲线；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114540526 A 2其中， 所述五种输入性疟原虫包括恶性疟原虫、 间日疟原虫、 三日疟原虫、 卵形疟原虫 和诺氏疟原虫。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114540526 A 3