(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210293019.4 (22)申请日 2022.03.23 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114540521 A (43)申请公布日 2022.05.27 (83)生物保 藏信息 GDMCC No： 61965 2021.09.2 9 (73)专利权人 广东省科 学院微生物研究所 （广 东省微生物分析检测中心） 地址 510000 广东省广州市越秀区先烈中 路100号大院6 6号楼 专利权人 广东环凯生物科技有限公司 　 广东科环生物科技有限公司 (72)发明人 吴清平　梁婷婷　李滢　谢新强　 吴磊　张菊梅　王涓　丁郁　 陈谋通　薛亮　叶青华　吴诗　 古其会　陈惠元　吴军林　(74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 刘明星　朱聪聪 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/04(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 WO 2022024023 A1,202 2.02.03 CN 112143820 A,2020.12.2 9 CN 1268178 A,20 00.09.27 KR 20200078171 A,2020.07.01 CN 1839201 A,20 06.09.27 (续) 审查员 陈咪咪 (54)发明名称 具有降糖降脂功效的植物乳杆菌84-3特异 性分子靶标及其检测方法 (57)摘要 本发明公开了具有降糖 降脂功效的植物乳 杆菌84‑3特异性分子靶标及其检测方法。 用于检 测植物乳杆菌或植物乳杆菌84 ‑3的特异性分子 靶标， 其特征在于， 所述的用于检测植物乳杆菌 的特异性 分子靶标是如SEQIDN O:1所示的核苷酸 序列， 所述的用于植物乳杆菌84 ‑3的特异性 分子 靶标是如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列。 本发明 的检测方法所需时间短， 只需将PCR产物进行琼 脂糖凝胶电泳即可准确知道样品中是否有植物 乳杆菌种及植物乳杆菌84 ‑3菌株， 降低了检测成 本。 本发明是针对植物乳杆菌种及植物乳杆菌 84‑3的菌株的特异性检测靶 标， 能将植物乳杆菌 从乳酸菌属中区分出来， 能够将 菌株植物乳杆菌 84‑3从植物乳杆菌属中区分出来， 是一种新的检 测方法。 [转续页] 权利要求书1页 说明书16页 序列表1页 附图11页 CN 114540521 B 2022.09.02 CN 114540521 B (56)对比文件 Chien-Hsun Huang et al. .“The mutL Gene as a Gen ome-Wide Taxo nomic Marker for High Reso lution Discrimi nation of Lactiplantibaci llus plantarum and Its Closely Related Taxa ”. 《Microorganisms》 .2021,第9卷 Fuhren， J.et al. .“CP055123.1 Lactiplantibaci llus plantarum strai n Heal19 c hromosome, complete gen ome”. 《GenBan k》 .2020, 梁婷婷.“基于多组学联合 解析益生乳酸菌 降糖降脂功效及作用机制研究 ”. 《中国优秀博硕 士学位论文全文数据库 （博士） 基础科 学辑》 .2022,(第06期),2/2 页 2[接上页] CN 114540521 B1.用于检测植物乳杆菌或植物乳杆菌84 ‑3的特异性分子靶标， 其特征在于， 所述的用 于检测植物乳杆菌的特异性分子靶标是如SEQ  ID NO:1所示的核苷酸序列， 所述的用于植 物乳杆菌84 ‑3的特异性分子靶标 是如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。 2.权利要求1所述的特异性分子靶标在检测植物乳杆菌种和/或植物乳杆菌84 ‑3中的 应用。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 权利要求1所述的特异性分子靶标在检测 含有植物乳杆菌和/或植物乳杆菌84 ‑3的功能食品及乳酸菌制品中的应用。 4.一种检测植物乳杆菌和/或植物乳杆菌84 ‑3的引物组， 其特征在于， 所述的检测植物 乳杆菌的引物为： 正向引物145F： 5' ‑ACGCCCAACTTTCCGTTGTA ‑3'和反向引物145R： 5' ‑ CGACCGCACTATGGATGTGT ‑3'； 所述的检测植物乳杆菌84 ‑3的引物为： 正向引物175F： 5' ‑ AGAGTTACGGCAGTTCAAAACA‑3'， 反向引物175R： 5' ‑ATCATCGTCGC CATCTCCT‑3'。 5.一种检测植物乳杆菌和/或植物乳杆菌84 ‑3的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)提取待检测微生物的DNA， 以提取的DNA为模板， 分别采用权利要求4所述的检测植 物乳杆菌种和/或植物乳杆菌84 ‑3的引物组对其进行PCR扩增； (2)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析， 电泳结果出现大小145bp和175bp的条带则 判定样品中分别含有植物乳杆菌和植物乳杆菌84 ‑3， 若电泳结果未出现目标大小的条带则 判定样品中不含有植物乳杆菌和植物乳杆菌84 ‑3。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增， 其反应体系为25μl， 其中包 括： 2×Taq PCR MasterMix Ⅱ12.5 μl、 正向引物和反向引物各1μl、 DNA模板1μl和无菌双蒸 水9.5 μl。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 当检测植物乳杆菌时， 其PCR反应条件为： 95℃预变性3min； 95℃变性30s， 68.5℃退火30s， 72℃延伸30s， 共30 ‑35个循环； 最后72℃延 伸10min。 8.根据权利 要求6所述的方法， 其特征在于， 当检测植物乳杆菌84 ‑3时， 其PCR反应条件 为： 95℃预变性3min； 95℃变性30s， 68℃退火30s， 72℃延伸30s， 共30 ‑35个循环； 最后72℃ 延伸10mi n。 9.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述的PCR扩增是实时荧光定量PCR扩增， 反应体系为20μl， 其中包括： 2 ×RealUniversal  PreMix预混液10μl,50 ×ROX Reference   Dye0.4 μl， 正向引物和反向引物各0.6 μl、 DNA模板1 μl和无菌双蒸水 7.4 μl。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 实时荧光定量PCR反应条件为： 95℃预变 性3min； 95℃变性5s， 60.0℃退火30s， 72℃延伸10s， 2 ‑4步共40个循环； 最后72℃延伸 10min。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540521 B 3