(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210291784.2 (22)申请日 2022.03.24 (71)申请人 扬州大学 地址 225009 江苏省扬州市大 学南路88号 申请人 扬州市扬子江种业有限公司 (72)发明人 李磊　赵阳　孙政玺　卞庆中　 李韬　 (74)专利代理 机构 南京纵横知识产权代理有限 公司 32224 专利代理师 王玉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定小麦抗寒性的InDel分子标记及其 应用 (57)摘要 本发明公开了一种鉴定小麦抗寒性的InDel 分子标记及其应用， 属于分子生物学领域。 一种 鉴定小麦抗寒性状的InDel 分子标记， 所述InDel 分子标记位于小麦的5A染色体， 核苷酸序列如 SEQ ID NO.1所示。 本发明利用PCR和电泳技术， 对小麦抗寒调节基因进行基因型选择以达到为 小麦抗寒性 分子标记辅助育种提供标记的目的。 本发明操作简单， 准确率高。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图1页 CN 114854891 A 2022.08.05 CN 114854891 A 1.一种鉴定小麦抗寒性状的InDel分子标记， 其特征在于， 所述InDel分子标记位于小 麦的5A染色体， 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.用于扩增权利要求1所述的I nDel分子标记的引物对， 其特 征在于， 包括： Ind025‑F： 5’ ‑TGGGTTGCTTTCATCATTCA‑3’ Ind025‑R： 5’ ‑AAGGATCCCCCTGTTTATGG‑3’。 3.一种鉴定小麦抗寒性状的方法， 其特征在于， 包括： 以待测小麦的基因组DNA为模板， 使用权利要求2所述的引物对进行PCR扩增。 4.根据权利要求3所述的一种鉴定小麦抗寒性状的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的 体系为： 模板DNA  3μl， 10μmol的上、 下游引物各0  .4μl， 10mM  dNTPs 0 .4μl， 10×PCR  buffer 2 μl， 用ddH2O补充反应 体系20 μl。 5.根据权利要求3所述的一种鉴定小麦抗寒性状的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的 反应程序为： 95℃预变性3min； 95℃变性30s， 56℃退火30s， 72℃延伸30s， 进行40个循环； 72 ℃延伸10mi n， 16℃保存， 扩增产物在3.5％的琼脂糖胶电泳分离 。 6.根据权利 要求3所述的一种鉴定小麦抗寒性状的方法， 其特征在于， InDel标记经PCR 扩增和电泳后， 在抗寒品种中显示200bp的片段， 而在不抗寒品种显示218bp的片段， 两者相 差18bp。 7.一种试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒用于检测小麦抗寒性状， 所述试剂 盒包括权利 要求2所述的引物对。 8.权利要求1所述的InDel分子标记或权利要求2所述的引物对在鉴定小麦抗寒性状 中 的应用。 9.权利要求1所述的InDel分子标记或权利要求2所述的引物对在抗寒小麦辅助育种中 的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854891 A 2一种鉴定小 麦抗寒性的InDel分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学领域， 具体涉及一种鉴定小麦抗寒性的InDel分子标记及 其应用。 背景技术 [0002]小麦是世界上三大粮食作物之一， 是世界上35%以上人口的口粮。 它的持续增 产和 稳产， 关系着 世界粮食安全。 长江中下游麦区推广品种绝大部 分为弱冬性或春性品种。 近年 来， 由于气候异常导致极端天气事件频发， 其中低温冷害成为影响该麦区小麦生长最主要 的自然灾害之一。 抗寒性不同的小麦品种对不良低温的反应表现出较大 的遗传差异， 推广 应用抗寒耐冷害的小麦品种 是稳产的关键。 传统育种中， 多采用生理生化或人为创造的逆 境胁迫条件评价品种的抗性， 抗寒育种目标的个体， 具有处理过程繁杂、 准确 性差、 工作量 大的缺点。 [0003]随着分子生物学的发展， 分子标记辅助选择可提高育种效率， 加速育种进程。 而寻 找与农艺性状紧密连锁的分子标记， 是进 行分子标记辅助选择育种的前提。 插入/缺 失多态 性(insertion/deletion， InDel)分子标记是基于插入/缺失位点两侧的序列设计特异性引 物， 通过聚合酶链式反应(PCR)扩增体现序列长度多态性的一种分子标记。 InDel标记开发 基于序列差异， 变异稳定、 准确性高， 避免了由于非特异 性和复杂性导致的后续分析模糊等 问题。 在整个基因组中， InDel标记的多态性频率仅次于SNP标记， 相比SNP标记， InDel标记 具有简单易操作的特点， 可直接利用电泳平台达 到基因分型的目的。 发明内容 [0004]本发明的目的在于克服现有表型鉴定技术中的不足， 提供一种小麦抗寒性鉴定的 InDel分子标记， 利用PCR和电泳技术， 对小麦抗寒调节基因进行基因型选择以达到为小麦 抗寒性分子标记辅助育种提供 标记的目的。 [0005]本发明所采用的技术方案是： 一种鉴定小麦抗寒性状的InDel分子标记， 所述 InDel分子标记位于小麦的5A染色体， 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 [0006]本发明还公开 一种用于扩增上述的I nDel分子标记的引物对， 包括： Ind025‑F： 5’ ‑TGGGTTGCTTTCATCATTCA‑3’（ SEQ ID NO.2） Ind025‑R： 5’ ‑AAGGATCCCCCTGTTTATGG‑3’（ SEQ ID NO.3） 。 [0007]本发明还公开一种鉴定小麦抗寒 性状的方法， 包括： 以待测小麦的基因组D NA为模 板， 使用上述的引物对进行PCR扩增。 [0008]本发明还公开一种鉴定小麦抗寒 性状的方法， 所述PC R扩增的体系为： 模板D NA 3 μ l， 10 μmol的上、 下游引物各0  .4 μl， 10mM dNTPs 0 .4 μl， 10×PCR buffer 2 μl， 用ddH2O补 充反应体系20 μl。 [0009]进一步地， 所述PCR扩增的反应程序为： 95℃预变性3min； 95℃变性30s， 56℃退火 30s， 72℃延伸30s， 进行40个循环； 72℃延伸10min， 16℃保存， 扩增产物在3.5％的琼脂糖胶说　明　书 1/3 页 3 CN 114854891 A 3