(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210298474.3 (22)申请日 2022.03.24 (71)申请人 北京安智因生物技 术有限公司 地址 100176 北京市大兴区北京经济技 术 开发区科创三街2 4号2号楼2-3厂房一 层 (72)发明人 曹彦东　周洋　杨鹏程　王月星　 李晓天　 (74)专利代理 机构 北京蕙识同联专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11966 专利代理师 刘晔 (51)Int.Cl. C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01)C40B 50/06(2006.01) C12N 15/11(2006.01) G16B 20/50(2019.01) G16B 25/20(2019.01) G16B 35/10(2019.01) G16B 35/20(2019.01) G16B 50/10(2019.01) G16B 50/30(2019.01) (54)发明名称 一种检测多囊肾疾病基因突变的捕获探针、 试剂盒和检测方法 (57)摘要 本申请涉及基因检测领域， 具体提供一种检 测多囊肾疾病基因突变的捕获探针、 试剂盒及其 检测方法， 本申请具有捕获效率高、 假阳性率低、 准确率高、 操作简单、 节约成本等诸 多优势。 权利要求书2页 说明书17页 附图5页 CN 114774515 A 2022.07.22 CN 114774515 A 1.一种用于多囊肾疾病基因测序的文库构建方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 1)对样本DNA添加i ndex； 2)使用bl ocker对i ndex进行封闭处 理； 3)加入捕获探针对目标区域进行捕获； 4)文库洗脱和PCR扩增； 5)文库纯化和定量。 2.权利要求1所述的建库方法， 其特征在于， 所述1)是基于TELL ‑Seq技术对样本DNA添 加index。 3.权利要求1 ‑2任一所述的建库方法， 其特征在于， 所述2)中blocker为能够与18bp接 头序列特异性互补结合的bl ocker序列。 4.权利要求1 ‑3任一所述的建库方法， 其特征在于， 所述3)中捕获探针是针对基因 PKD1、 PKD2全长的探针， 和针对基因PKHD1、 ALG8、 ALG9、 ANKS6、 COL4A3、 COL4A4、 COL4A5、 COL4A6、 DNAJB11、 DZ IP1L、 FLCN、 GANAB、 HNF 1B、 LRP5、 MYH9、 TSC1、 TSC2和V HL全编码区及可变 剪切区的探针。 5.权利要求1 ‑4任一所述的建库方法， 其特征在于， 所述探针序列如SEQ  ID NO.1‑227 所示。 6.权利要求1 ‑5任一所述的建库方法， 其特 征在于， 所述方法具体如下步骤： 1)基于TEL L‑Seq技术对样本DNA添加i ndex： 2)使用blocker对index进行封闭处理： 在 步骤1的文库中加入blocker， 混匀并通过PCR 杂交程序进行杂交反应； 3)加入捕获探针对目标区域进行捕获： 混合DNA模板与所需试剂离心混匀， 并通过PCR 杂交程序进行杂交反应； 4)文库洗脱和PCR扩增： 使用链霉亲和素磁珠清洗、 捕获， 将链霉亲和素磁珠加入到杂 交体系中， 混匀孵 育后完成洗脱； 文库中加入PCR反应液， 按标准PCR反应条件进行PCR扩增。 5)文库纯化和定量。 7.一种用于多囊肾疾病基因测序文库构建的捕获探针集， 其特征在于， 所述探针序列 如SEQ ID NO.1‑227所示。 8.一种用于多囊肾疾病基因测序文库构建的产品， 其特征在于， 包括权利要求7所述的 捕获探针集。 9.权利要求7 所述捕获探针集在制备用于多囊肾疾病检测试剂盒中的应用。 10.一种多囊肾疾病检测系统， 其特征在于， 包括文库构建模块、 测序及数据分析模块、 和变异结果注释及解读模块； 所述文库构建模块用于执 行权利要求1 ‑6任一所述文库构建方法； 所述测序及数据分析模块用于执 行如下： 1)Illumina平台测序仪进行测序。 2)对测序结果进行拆分及校正， 并进行测序数据质控； 3)将测序结果文件比对到人类基因组参考序列hg19/GRCh37， 分析数据目标区域的覆 盖度情况， 对测序数据进行质控； 4)对目标区域的SNP、 CNV及SV进行检测；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114774515 A 2所述变异结果注释及解读模块用于执 行如下： 1)根据ClinVar、 1000G、 HGMD、 ClinGen、 dbVar、 gnomAD数据库， 对检测到的S NP及INDEL、 CNV和SV进行注释， 分析突变对多囊肾疾病的致病性； 2)依据ACMG指南标准， 对突变进行人工解读， 筛选出致病突变， 并根据致病性结果出具 检测报告。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114774515 A 3