(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210297445.5 (22)申请日 2022.03.24 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.15278 2018.01.2 9 (71)申请人 广西壮族自治区农业科 学院 地址 530007 广西壮 族自治区南宁市西乡 塘区大学东路174 号 (72)发明人 王晓国　韦仕岩　王灿琴　唐军　 韦娇君　刘增亮　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 王颖 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12Q 1/04(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种快速鉴别短毛木耳的分子标记及其应 用 (57)摘要 本发明公开了一种快速鉴别短毛木耳的分 子标记及其应用， 属于分子标记技术领域。 所述 分子标记的核苷酸如SEQ  ID NO： 1所示， 该序列 第120位为C， 第130 ‑133位为TCTA； 利用该分子 标 记设计特异性引物对， 其核苷酸序列如SEQ  ID  NO： 5‑6所示。 本发明利用特异性引物对能够将短 毛木耳和木耳属其他种类的木耳区分开， 这为明 确鉴别短毛木耳与黑木耳等人工栽培品种提供 了技术支持， 有利于短毛木耳野生资源的保护和 可持续开发。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图1页 CN 114540535 A 2022.05.27 CN 114540535 A 1.一种鉴别短毛木耳的分子标记， 其特征在于， 其核苷酸如SEQ  ID NO： 1所示， 该序列 第120位为C， 第13 0‑133位为TCTA。 2.一种权利要求1所述的鉴别短毛木耳分子标记的扩增引物对， 其特征在于， 其核苷酸 序列如SEQ  ID NO： 5‑6所示。 3.一种试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求2所述的引物对。 4.一种鉴别短毛木耳的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 以待测木耳的基因组DNA为模板， 利用权利要求2所述的引物对扩增目的片段， 电泳检 测， 根据所检测的结果判断是否为短毛木耳。 5.根据权利要求4所述的鉴别短毛木耳的方法， 其特征在于， 所述目的片段的核苷酸序 列如SEQ ID NO： 2所示， 或者包括SEQ  ID NO： 2所示序列的基因片段。 6.根据权利要求4所述的鉴别短毛木耳的方法， 其特征在于， 扩增反应体系为： 2 × Flash Hot Star Master Mix 15 μL， ddH2O 12 μL， 上游引物F/下游引物R各1 μL， R ‑primer 1 μL和DNA模板1 μL。 7.根据权利要求4所述的鉴别短毛木耳的方法， 其特征在于， 扩增反应程序为： 95℃预 变性3min， 95℃变性3 0s； 56℃退火3 0s； 72℃延伸3 0s； 29个循环， 72℃终延伸7mi n。 8.根据权利要求1所述的分子标记或者权利要求2所述的引物对或者权利要求3所述的 试剂盒或者权利要求 4所述的方法在选 育短毛木耳品种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540535 A 2一种快速鉴别短毛木耳的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子标记技术领域， 特别是涉及一种快速鉴别短毛木耳的分子标记及 其应用。 背景技术 [0002]短毛木耳是黑木耳的近似种， 隶属于木耳目木耳科木耳属， 是一种药食兼用的野 生真菌， 主要分布在热带亚热带地区。 当前， 市场流通的短毛木耳多为采集的野生干品， 在 外观上和黑木耳极为相似， 难以辨别， 严重影响了短毛木耳资源的保护和可持续 开发。 [0003]ISSR分析技术虽然可鉴别区分木耳属的不同种类， 但该技术也存在带型不稳定、 特征条带序列不确定等缺点， 而且往往需要多个引物进行鉴别， 工序较繁琐。 为此， 有必要 开发一种能简单、 快速、 明晰地鉴别短毛木耳与黑木耳等人工栽培的种类的分子标记， 能快 速的对短毛木耳进行区分。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种快速鉴别短毛木耳的分子标记及其应用， 以解决上述现 有技术存在的问题， 通过筛选短毛木耳的分子标记， 设计特异 性引物， 实现了特异 性鉴别短 毛木耳的目的， 以准确区分 短毛木耳和木耳属其 他种类木耳。 [0005]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0006]本发明提供一种鉴别 短毛木耳的分子标记， 其核苷酸如SEQ  ID NO： 1 所示， 该序 列第120位 为C， 第13 0‑133位为TCTA。 [0007]本发明还提供一种所述的鉴别短毛木耳分子标记的扩增引物对， 其核苷酸序列如 SEQ ID NO： 5‑6所示。 [0008]本发明还提供一种试剂盒， 包括所述的引物对。 [0009]本发明还提供一种鉴别短毛木耳的方法， 包括以下步骤： [0010]以待测木耳的基因组DNA为模板， 利用所述的引物对扩增目的片段， 电泳检测， 根 据所检测的结果判断是否为短毛木耳。 [0011]优选的是， 所述目的片段的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 2所示， 或者包括SEQ  ID NO： 2所示序列的基因片段。 [0012]优选的是， 扩增反应体系 为： 2×Flash Hot Star Master Mix 15 μL， ddH2O 12 μ L， 上游引物F/下游引物R各1 μL， R ‑primer 1 μL和DNA模板1 μL。 [0013]优选的是， 扩增反应程序为： 95℃预变性3min， 95℃变性30s； 56℃退火30s； 72℃延 伸30s； 29个循环， 72℃终延伸7mi n。 [0014]本发明还提供所述的分子标记或者所述的引物对或者所述的试剂盒或者所述的 方法在选 育短毛木耳品种中的应用。 [0015]本发明公开了以下技 术效果： [0016]本发明通过筛选得到能够 鉴别短毛木耳的分子标记， 利用该分子标记的突变位点说　明　书 1/6 页 3 CN 114540535 A 3