(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210297569.3 (22)申请日 2022.03.24 (71)申请人 浙江省林业科 学研究院 地址 310023 浙江省杭州市西湖区留和路 399号 (72)发明人 杨华　宋绪忠　王秀云　 (74)专利代理 机构 杭州星河慧专利代理事务所 (普通合伙) 33410 专利代理师 刘晓丹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种杜鹃杂交种鉴定的S SR引物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种杜鹃杂交种鉴定的SSR引 物及其应用。 所述SSR引物包 括第一对SSR引物序 列或者第二对SSR引物序列： 第一对SSR引物序 列 ：正 向 引 物 序 列 F P r 1 ( 5 ' ‑3 ') ： CCATTGCACCAAGAGACAGA； 反向引物序列RP r1(5'‑ 3')： GTACCTCCATTCCCCCTTGT； 第二对SSR引物序 列 ：正 向 引 物 序 列 F P r 2 ( 5 ' ‑3 ') ： TTGTGCATTCTCTAGGCACG； 反向引物序列RP r2(5'‑ 3')： GACAAGAAAACCACCCGAAA。 该引物可以将刺毛 杜鹃、 鹿角杜鹃、 刺毛杜鹃 ×鹿角杜鹃杂交种明 显地区分开， 实现刺毛杜鹃、 鹿角杜鹃、 刺毛杜鹃 ×鹿角杜鹃杂交种的早期鉴定。 该引物能准确获 得目标DNA片段的大小， 检测结果稳定、 准确且高 效， 适用于 大批量刺毛杜鹃、 鹿角杜鹃、 刺毛杜鹃 ×鹿角杜鹃杂交种的检测分析。 权利要求书2页 说明书8页 序列表1页 附图6页 CN 114891910 A 2022.08.12 CN 114891910 A 1.一种杜鹃杂交种鉴定的SSR引物， 其特征在于， 所述SSR引物包括以下第一对SSR引物 序列或者第二对S SR引物序列： 第一对SSR引物序列： 正向引物序列FPr1(5' ‑3')： CCATTGCACCAAGAGACAGA； 反向引物序列RPr1(5' ‑3')： GTAC CTCCATTCCCCCTTGT； 第二对SSR引物序列： 正向引物序列FPr 2(5'‑3')： TTGTGCATTCTCTAGGCACG； 反向引物序列RPr 2(5'‑3')： GACA AGAAAACCACCCGAAA。 2.根据权利要求1所述的S SR引物， 其特 征在于， 所述S SR引物为 荧光SSR标记引物。 3.根据权利 要求2所述的SSR引物， 其特征在于， 所述荧光SSR标记引物为FAM荧光SSR标 记引物、 H EX荧光SSR标记引物、 TAMRA荧 光SSR标记引物、 TET荧 光SSR标记引物中的一种。 4.根据权利要求1或2所述的SSR引物， 其特征在于， 所述杜鹃杂交种鉴定包括刺毛杜 鹃、 鹿角杜鹃、 刺毛杜鹃与鹿角杜鹃杂交种的鉴定 。 5.根据权利要求1 ‑3任一项所述的杜鹃杂交种鉴定的SSR引物在区分刺毛杜鹃、 鹿角杜 鹃、 刺毛杜鹃与鹿角杜鹃杂交种中的应用。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述 区分刺毛杜鹃与鹿角杜鹃杂交种包括 区分刺毛杜鹃与鹿角杜鹃杂交种的不同亲本个体的杂交组合， 所述SSR引物 为第一对SSR引 物序列。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述刺毛杜鹃包括扩增条带有230bp特异 条带的第一刺毛杜鹃和/或扩增条 带有239bp和249bp特异条 带的第二刺毛杜鹃； 所述鹿角杜鹃包括扩增条 带有243bp和246bp特异条 带的第一鹿角杜鹃； 所述刺毛杜鹃与鹿角杜鹃杂交种包括扩增条带有230bp和243bp特异条带的第一刺毛 杜鹃与第一鹿角杜鹃杂交种和/或扩增条带有2 43bp和249b p特异条带的第二刺毛 杜鹃与第 一鹿角杜鹃杂交种。 8.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述SSR引物为第二对SSR引物序列； 所述 鹿角杜鹃包括扩增条带有206bp和210bp特异条带的第一鹿角杜鹃； 所述刺毛 杜鹃包括扩增 条带有438b p特异条带的第一刺毛 杜鹃和/或第二刺毛 杜鹃， 所述刺毛 杜鹃与鹿角杜鹃杂交 种包括扩增条 带有214bp和438bp特异条 带的杂交种。 9.根据权利要求5所述的应用， 其特 征在于， 采用包括以下步骤的方法进行区分： (a)提取待测杜鹃个 体嫩叶的DNA； (b)以步骤(a)提取的DNA作为模板， 采用杜鹃杂交种鉴定的S SR引物进行PCR扩增； (c)PCR扩增产物经毛细管电泳检测， 获得待测杜鹃个 体的PCR扩增条 带； 所述SSR引物为第一对SSR引物序列， 扩增条带有243bp和246bp 特异条带的为第一鹿角 杜鹃， 扩增条带有230bp特异条带的为第一刺毛 杜鹃， 扩增条带有239bp和249bp特异条带的 为第二刺毛 杜鹃， 扩增条带有230b p和243bp特异条带的为第一刺毛 杜鹃与第一鹿角杜鹃杂 交种， 扩增条带有243bp和249b p特异条带的为第二刺毛 杜鹃与第一鹿角杜鹃杂交种； 或者， 扩增条带有239bp和245bp特异条带的为其它鹿角杜鹃， 扩增条带有230bp和233bp特异条带 的为杂交种； 或者， 所述SSR引物为第二对SSR引物序列， 扩增条带有206bp和210bp特异条带的为第权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114891910 A 2一鹿角杜鹃， 扩增条带有438bp特异条带的为第一刺毛杜鹃和 /或第二刺毛杜鹃， 扩增条带 有214bp和438bp特异条 带的为杂交种。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114891910 A 3