(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210299200.6 (22)申请日 2022.03.25 (71)申请人 中国农业大 学 地址 100193 北京市海淀区 圆明园西路2号 (72)发明人 孙其信　倪中福　柴岭岭　刘杰　 宿振起　辛明明　王乃娇　耿佳　 闫文文　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 关畅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种小麦矮杆基因Rht8的功能KASP分子标 记及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种小麦矮杆基因Rht8的功 能KASP分子标记及其应用。 具体地公开了检测小 麦Rht8基因的第1649 ‑1650位核苷酸是否由 “CG” 突变为“T”的物质在鉴定或辅助鉴定小麦株高性 状中的应用。 本发明公开了核苷酸序列为SEQ  ID  No.1和/或2所示的分子 标记。 本发明提供了所述 分子标记的引物组合物、 含有所述引物组合物的 试剂盒及利用所述引物组合物鉴定小麦株高的 方法。 本发明的KASP分子标记及其引物能够快 速、 精准、 高通量地鉴定Rht8基因的矮杆等位型， 可高效检测和追踪小麦品种/品系中基因Rht8， 加快矮杆基因Rht8的高效育种利用， 具有 准确性 高、 特异性强、 检测简单便捷， 经济高效的特点。 权利要求书1页 说明书11页 序列表2页 附图3页 CN 114517241 A 2022.05.20 CN 114517241 A 1.检测小麦Rht8基因的第1649 ‑1650位核苷酸是否由 “CG”突变为“T”的物质在鉴定或 辅助鉴定小麦株高性状中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述物质含有扩增包含所述小麦Rht8基因 的第1649 ‑1650位核苷酸在内的小麦基因 组DNA片段的PCR引物。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述物质含有扩增包含分子标记在内的小 麦基因组DNA片段的PCR引物， 所述分子标记是核苷酸序列为SEQ  ID No.1所示的DNA分子 和/或SEQ ID No.2所示的DNA分子 。 4.根据权利要求2或3所述的应用， 其特征在于， 所述PCR引物为引物组合物， 所述引物 组合物由引物KASP ‑Rht8‑F、 引物KASP ‑Rht8‑H和引物KASP ‑Rht8‑L中的至少两种引物组成， 所述引物KASP ‑Rht8‑F为核苷酸序列是SEQ  ID No.3的单链DNA， 所述引物KASP ‑Rht8‑H为核 苷酸序列是SEQ  ID No.4的单链DNA； 所述引物KASP ‑Rht8‑L为核苷酸序列是SEQ  ID No.5的 单链DNA。 5.权利要求3中所述的分子标记， 和/或， 权利要求2或3中所述的PCR引物， 和/或， 权利 要求4中所述的引物组合物， 和 /或， 含有权利要求2或3中所述的PCR引物或权利要求4中所 述的引物组合物的试剂或试剂盒。 6.一种鉴定或辅助鉴定小麦株 高性状的方法， 其特征在于， 所述方法包括以下步骤： 以 待鉴定小麦基因组DNA为模板， 利用权利要求4中所述引物组合物进行KASP， 得到PCR产物； 根据所述PCR产物的荧光信号确定待鉴定小麦Rht8基因的第1649 ‑1650位核苷酸是否由 “CG”突变为“T”来鉴定小麦株高性状。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 根据所述PCR产物 的荧光信号来鉴定小麦 株高性状为： Rht8基因的第1649 ‑1650位核苷酸没有由 “CG”突变为“T”的待鉴定小麦的株高 高于Rht8基因的第1649 ‑1650位核苷酸由 “CG”突变为“T”的待鉴定小麦 。 8.权利要求5中所述的试剂或试剂盒在鉴定或辅助鉴定小麦株高性状中的应用。 9.权利要求3中所述的分子标记， 和/或， 权利要求2或3中所述的PCR引物， 和/或， 权利 要求4中所述的引物组合物， 和/或， 权利要求5中所述的试剂或试剂盒的下述任一种应用： B1)在制备鉴定或辅助鉴定小麦株高性状的产品中的应用； B2)在选育小麦株高性状优良品种中的应用； B3)在制备选 育小麦株高性状优良品种的产品中的应用； B4)在小麦 育种中的应用； B5)在制备小麦 育种的产品中的应用； B6)在小麦种质资源分析或鉴定中的应用。 10.小麦育种的方法， 其特征在于， 所述方法包括选择T ‑基因型的小麦作为亲本进行育 种， 所述T ‑基因型的小麦是小麦染色体中Rht8基因的第1649 ‑1650位核苷酸由 “CG”突变为 “T”的小麦。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114517241 A 2一种小麦矮杆基因Rht8的功能KASP分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域， 具体地涉及一种小麦矮杆基因Rht8 的功能KAS P分子标记及其应用。 背景技术 [0002]小麦(Triticum  aestivum L.)是世界上栽培最广泛的粮食作 物， 为人类提供了约 21％的食物热量和20％的蛋白质。 小麦也是我国的主要粮食作物之一， 持续提高我国小麦 产量水平对于确保国家 粮食安全具有十 分重要的意义。 我国新的粮食安全战略目标为要确 保谷物自给率保持在95％以上， 其中水稻、 小麦两大口粮保持100％自给。 因此， 随着人口不 断增加和耕地面积的减少， 培育高产优质小麦新品种， 进一步提高我国小麦单产对于保障 国家粮食安全具有重要的战略意 义。 [0003]株高是影响小麦株型和产量的重要性状。 降低株高可以增强小麦 的抗倒伏能力， 同时提高收获指数， 从而实现小麦的增产与稳产。 在小麦由中产向高产转变的过程中， 生产 上遇到的首要问题是 因生产条件的改善而引起的倒伏问题。 过去生产上延用的中高秆 品种 在高产条件下会出现严重倒伏而减产， 抗倒伏是高产育种的主要目标之一。 尽管倒伏还与 茎秆的坚韧度、 弹性、 基部节间长度以及根的分布深度等特性有关， 但株高仍是造成倒伏的 主要因素。 由于小麦矮秆 品种具有茎 秆矮、 抗倒伏、 收获指数高、 水肥增产效应大等优点， 因 此提高了其产量潜力， 改良了稳产性能。 随着小麦产量水平的提高和生产条件的改善， 小麦 品种株高逐步矮化， 进一步选育矮秆和半矮秆 品种是现代小麦育种的发展趋势。 因此， 研究 小麦株高的遗传决定机制， 开发与小麦矮杆基因连锁的分子标记， 从而利用该标记筛选矮 杆基因的等位变异类型， 为选育高产抗倒伏小麦品种奠定理论基础， 对小麦品种改良至关 重要。 [0004]KASP(竞争性等位基因特异性PCR， Kompetit ive Allele Specific  PCR)技术是一 种基于PCR过程中引物末端碱基特异性匹配来实现SNP(Single  Nucleotide   Polymorphi sms， 单核苷酸多态性)及InDel(insertion ‑deletion， 插入缺失位点)检测分型 的方法， 能够精确地进行双等位基因分型， 且通量高、 成本低、 效率高、 准确度高、 遗传稳定 性好。 KASP在小到中等数量的标记应用中显示出了成本效益和可扩展的灵活性， 因此基于 KASP技术挖掘鉴定小麦株高的KASP分子标记， 用于筛选矮秆和半矮秆品种小麦， 对小麦高 产辅助选择育种具有重要价 值。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技术问题是如何更快速、 精准和/或高通量地鉴定或辅助鉴定 小麦株高性状。 所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题， 本领域技术人员通过以下 描述可以清楚地理解本文未提及的其它技 术主题。 [0006]为解决上述技术问题， 本发明首先提供了检测小麦Rht8基因的第 1649‑1650位核 苷酸是否由 “CG”突变为“T”的物质在鉴定或辅助鉴定小麦株高性状中的应用。说　明　书 1/11 页 3 CN 114517241 A 3