(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210311400.9 (22)申请日 2022.03.28 (71)申请人 中国科学院南海 海洋研究所 地址 511458 广东省广州市南沙区海 滨路 1119号 (72)发明人 陈廷　张鑫　陈国良　胡超群　 任春华　王艳红　江晓　刘永奎　 宋宏斌　周腾　徐涛　杨昊　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 陈洁娣　刘明星 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染相关 的几丁质结合蛋白基因上的SNP标记及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与凡纳滨对虾抗副溶血 弧菌感染相关的几丁质结合蛋白基因上的SNP标 记及其应用。 所述的SNP标记位于如SEQ  ID NO.1 所示的凡纳滨对虾几丁质结合蛋白基因序列的 501bp位点处， 突变类型为T纯合、 T/A杂合和A纯 合， 该标记的抗副溶血弧菌感染优势基因型为T 纯合。 本发 明同时公开了利用上述标记进行抗副 溶血弧菌感染性状标记辅助育种的应用方法。 本 发明提供了一种有效地开展凡纳滨对虾分子标 记辅助抗副溶血弧菌感染性状遗传选育的方法， 该方法效率高， 操作 简单， 选育个体基因型稳定， 不发生遗传分化， 可显著加快抗病育种进展， 对 提高凡纳滨 对虾抗病养殖具有重要指导 意义。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图1页 CN 114574597 A 2022.06.03 CN 114574597 A 1.一种区分凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染性状相关的SNP分子标记， 其特征在于， 所述 的SNP分子标记位于如SEQ  ID NO.1所示的凡纳滨对虾几丁质结合蛋白基因序列的501bp位 点处， 突变 类型为T纯合、 T/A杂合和A纯合。 2.一种区分凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染性状相关的SNP分子标记的检测引物， 其特 征在于， 所述引物为： LvCBP‑SNP‑F： 5'‑CCAAGGCAATGAAACCCTCAGACA ‑3'； LvCBP‑SNP‑R： 5'‑TCATTCATCCATCACCATAAGT‑3'。 3.鉴别权利要求1所述的SNP分子标记的产品在制备区分凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感 染能力的试剂中应用。 4.权利要求1所述的SNP分子标记或权利要求2所述的检测引物在制备区分凡纳滨对虾 抗副溶血弧菌感染能力的检测试剂盒中的应用。 5.一种区分凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染能力检测试剂盒， 其特征在于， 包含权利要 求2所述的检测引物。 6.权利要求1所述的SNP分子标记、 权利要求2所述的检测引物或权利要求5所述的检测 试剂盒在区分凡纳滨 对虾抗副溶 血弧菌感染能力中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述的SNP分子标记为T纯合基因型的凡纳 滨对虾抗副溶血弧菌感染能力显著 高于T/A杂合基因型， SNP分子标记为T/A杂合基因型的 凡纳滨对虾抗副溶 血弧菌感染能力又显著高于A纯合基因型。 8.权利要求1所述的SNP分子标记、 权利要求2所述的检测引物或权利要求5所述的检测 试剂盒在抗副溶血弧菌感染性状凡纳 滨对虾亲虾个体鉴定、 群体选育或耐副溶血弧菌感染 凡纳滨对虾高抗品系维持中的应用。 9.一种凡纳滨 对虾抗副溶 血弧菌感染品种的选 育方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： a)提取待测凡纳滨 对虾基因 组DNA； b)利用权利要求2所述的检测引物LvCBP ‑SNP‑F/LvCBP‑SNP‑R对待测凡纳滨对虾基因 组DNA进行PCR扩增； c)使用LvCBP ‑SNP‑F引物对扩增产物进行Sanger测序， 根据测序峰图对上述 的抗副溶 血弧菌感染性状相关位 点进行SNP分型； d)选择T纯合型的雌虾和雄虾作为亲本， 进行交配产生下一代育种群 体。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114574597 A 2一种与凡纳滨对虾 抗副溶血弧菌感 染相关的几丁质结 合蛋白 基因上的SNP标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属水产养殖生物技术领域， 更具体地说， 涉及 基因单核苷酸多态性(S NP)的 检测， 特别涉及一种凡纳滨对虾几丁质结合蛋白基因上一个引起氨基酸序列改变产生的 SNP分子标记， 和其在抗副溶 血弧菌感染对虾亲本、 虾苗 鉴定及抗病育种方面的应用。 背景技术 [0002]凡纳滨对虾(Litopenaeus  vannamei， 俗称南美白对虾)是世界和我国产量第一大 养殖对虾主要种类， 在 满足人民优质蛋白食品需求方面具有重大作用。 根据 《2021 中国渔业 统计年鉴》 ， 2020年我国凡纳滨对虾养殖年产量 186万多吨， 占全国对虾 年产量的8 6％， 虾苗 生产量15000多亿尾， 市场对良种的需求巨大。 然而， 近年来频繁暴发的细菌性病害给养殖 生产造成了巨大 的经济损失； 另一方面， 细菌性病害的流行和有效防控技术不足也造成了 抗菌素的乱用和滥用， 产生药物残留、 环境污染、 抗药性菌株蔓延等诸多负面影响。 因此， 从 种质层面入手， 深入发掘和利用凡纳滨对虾的抗菌种质， 选育抗菌能力强的优良新品种和 筛选抗菌能力强的苗种用于 养殖生产， 成为细菌性病害防控研发的重点和热点。 [0003]细菌病是危害最严重 的病害之一， 而弧菌病是对虾养殖过程中最为常见、 危害最 大的细菌性疾病。 副溶血性弧菌(Vibrio  parahaemolyticus)是人们发现最早的对虾弧菌 病原， 是凡纳 滨对虾主要的条件致病菌。 近年来对虾养殖中最为严重的疾病之一 “急性肝胰 腺坏死综合症(AHPND) ”就是由携带毒力基因Pir  A和Pir B的副溶血弧菌导致的。 2009年首 次报道在中 国暴发凡纳滨对虾AHPND， 随后在墨西哥、 马拉西亚、 泰国、 菲律宾、 越南、 孟加拉 国和美国相继暴发。 具体症状为肝胰腺苍白， 萎缩， 脱落， 空肠 空胃， 发病1 ‑3天内病死率达 到100％， 给养殖生产造成了极大地损失。 [0004]由于坚硬表皮的限制， 甲壳动物必须经过蜕皮才能发育和生长。 凡纳滨对虾一生 经历 35～37次蜕皮， 每次蜕皮后免疫力下降， 均是弧菌最容易入侵的时期。 作为表皮组成 成分的几丁质是和蛋白质以结合的形式存在， 此蛋白即为几丁质结合蛋白(Chitin   binding protein，  CBP)， 是甲壳动物表皮中重要的结构性蛋白， 该类蛋白一般含有特征性 的结构域， 与几丁质构成的复合物不仅为钙化作用提供有机支架， 而且参与控制钙化的程 度， 对蜕皮后凡纳滨 对虾的抗弧菌感染能力具有重要作用。 [0005]随着现代生物技术和遗传学技术在水产领域的快速转化， 以性状相关功能基因为 基础的分子标记技术成为水产遗传育种的关键技术之一。 SNP作为一种遗传标记， 具有发生 频率高、 能稳定遗传、 易进 行自动化检测等优点， 并且在不同物种、 不同品种间SNP分布都存 在差异。 而在水产动物种苗繁育和遗传育种中， SNP标记已运用多年， 一些与生长、 繁殖及抗 病性状等相关的分子标记陆续被筛选到。 本发明旨在通过发掘与凡纳 滨对虾抗副溶血弧菌 感染性状相关的SNP标记， 并通过应用该标记建立一种用于凡纳滨对虾分子标记辅助抗病 育种的方法。说　明　书 1/5 页 3 CN 114574597 A 3