(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210313379.6 (22)申请日 2022.03.28 (71)申请人 浙江省农业科 学院 地址 310021 浙江省杭州市石桥路198号 (72)发明人 虞慧芳　顾宏辉　王建升　盛小光　 沈钰森　赵振卿　 (74)专利代理 机构 成都知棋知识产权代理事务 所(普通合伙) 51325 专利代理师 马超前 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) A01H 1/02(2006.01) (54)发明名称 一种与西 兰花下胚轴颜色性状连锁的SNP分 子标记及其应用和方法 (57)摘要 本发明公开了一种与西兰花下胚轴颜色性 状连锁的SNP分子标记及其应用和方法， 该SNP分 子标记的引物组的核苷酸序列如SEQIDNO.1、 SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示， 该SNP分子标记的 位点为chr9.60229243， 该位点具有G/A多态性。 本发明的与西 兰花下胚轴颜色连锁的SNP分子标 记， 能够应用于西兰花下胚轴颜色性状鉴定， 检 测方便， 通 量高。 权利要求书2页 说明书5页 序列表1页 附图1页 CN 114836560 A 2022.08.02 CN 114836560 A 1.一种与西兰花下胚轴颜色性状连锁的SNP分子标记的引物组， 其特征在于， 该SNP分 子标记的引物 组的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1、 SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示， 该SNP分 子标记的位 点为chr9.60229243， 该位 点具有G/A多态性。 2.如权利要求1所述的SNP分子标记的引物组的应用， 其特征在于， 该应用选自以下任 意一种应用： (1)在西兰花分子标记辅助育种方面的应用； (2)在西兰花改良育种中的应用； (3)在西兰花下胚轴或花蕾颜色性状鉴定中的应用； (4)在研究西兰花下胚轴颜色性状方面的应用。 3.用于鉴定西兰花下胚轴颜色性状的KASP试剂盒， 其特征在于， 该试剂盒中的引物为 如权利要求1所述的SNP分子标记的引物组。 4.一种鉴定西兰花下胚轴 颜色性状的方法， 其特征在于， 该方法采用如权利要求1所述 的SNP分子标记的引物组通过KASP反应检测， 根据产物的基因型判断西兰花下胚轴颜色性 状： 若SNP分子标记位点chr9.60229243的基因型为G： G或G： A， 表明待检测个体下胚轴为紫 色； 若SNP分子标记位 点chr9.60229243的基因型为A： A， 表明待检测个 体下胚轴为绿色。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 对所述KASP反应的产物进行荧光数据读 取， 根据荧 光颜色确定基因型： 若荧光为蓝色， 表示SNP分子标记位 点chr9.60229243的基因型为G： G； 若荧光为红色， 表示SNP分子标记位 点chr9.60229243的基因型为A： A； 若荧光为紫色， 表示SNP分子标记位 点chr9.60229243的基因型为G： A。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述KASP反应， 反应总体系 1.6μL， 其中核 苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的引物的终浓度为1.74μM， 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1、 SEQ   ID NO.2所示的引物的终浓度均为0.69 μM， KAS P反应液中还 含有1×KASP MasterMix。 7.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述KASP反应， Touchdown  PCR反应条件 为： 94℃预变性15min， 1个循环； 94℃变性20s， 61～55℃退火并延伸60s， 10个循环， 每个循 环退火及延伸的温度降低0.6℃； 第二步扩增反应， 94℃变性20s， 55℃退火并延伸60s， 26个 循环。 8.一种针对下胚轴为紫色的西兰花进行分子标记辅助改良的方法， 其特征在于， 该方 法包含： (1)以下胚轴为紫色的西兰花为父本， 以下胚轴为绿色的西兰花为母本， 在开花期进行 杂交， 待种荚成熟后收集种子， 为F1代； (2)以F1代植株为母本， 以下胚轴为紫 色的西兰 花为父本， 在开花期 进行杂交， 待种荚成 熟后收集种子， 为BC1F1代； (3)提取B C1F1代植株的基因组DNA， 采用如权利要求1中所述的SNP分子标记的引物组通 过KASP反应检测， 根据产物的基因型判断西兰花下胚轴颜色性状： 若SNP分子标记位点 chr9.60229243的基因型为G： G或G： A， 表明待检测个体下胚轴为紫色； 若SNP分子标记位点 chr9.60229243的基因型为A： A， 表明待检测个体下胚轴为绿色； 在BC1F1世代中， 基因型为A：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114836560 A 2A和G： A的单株保留， 在入选的单株中选择农艺、 经济性状接近下胚轴为紫色的轮回亲本的 植株； (4)将选择的农艺、 经济性状接近下胚轴为紫色的轮回亲本的植株与该轮回亲本回交， 获得BC2F1世代； (5)对获得的BC2F1世代按照步骤(3)进行选择， 并按照步骤(4)与轮回亲本回交， 获得 BC3F1世代， 并以同样方法进行选择和回交直至BC6F1世代， 再对其进行自交， 获得遗传稳定 的BC6F2世代， 从BC6F2世代中筛选下胚轴绿色位点纯合的个体， 为下胚轴颜色得到改良的西 兰花。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 所述父本选自西兰花 ‘DH 16‑2’； 所述母本 选自西兰花 ‘DH 28‑4’。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114836560 A 3