(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210312573.2 (22)申请日 2022.03.28 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114606339 A (43)申请公布日 2022.06.10 (73)专利权人 广东省农业科 学院蔬菜研究所 地址 510640 广东省广州市天河区金颖路 66号广东省农业科 学院蔬菜研究所 (72)发明人 钟玉娟　黄河勋　薛舒丹　杜虎　 谢大森　陆森　林越　姚春鹏　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 薛建强 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 108048595 A,2018.0 5.18 审查员 贾星航 (54)发明名称 与南瓜肌醇含量主效QTL连锁的KASP分子标 记及其应用 (57)摘要 本发明公开了与南瓜肌醇含量主效QTL连锁 的KASP分子 标记及其应用。 在本发明中， 所述SNP 分子标记为(1)～(2)中的至少一种， 其中， (1)位 于中国南瓜15号染色体上第2459706位碱基， 其 碱基为G或A； (2)为位于中国南瓜15号染色体上 第2715672位碱基， 其碱基为T或C。 而针对 这两个 分子标记开发的KASP引物对能够快速且准确的 对南瓜肌醇含量高的品种进行鉴定， 有助于南瓜 的分子育种改良， 相比传统育种筛选， 其可检测 的样本量大， 大 大节约了成本和时间。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图5页 CN 114606339 B 2022.10.28 CN 114606339 B 1.SNP分子标记， 其特 征在于， 所述SNP分子标记为 （1）~（2） 中的至少一种： （1） 位于SEQ  ID NO： 1所示序列自5 ’端起第15 0位碱基， 其碱基为G或A； （2） 位于SEQ  ID NO： 2所示序列自5 ’端起第15 0位碱基， 其碱基为T或C； 所述SNP分子标记位于南瓜肌醇含量连锁的主效QTL 位。 2.权利要求1所述的SNP分子标记在制备筛 选不同肌醇含量的南瓜的产品中的应用。 3.用于检测权利要求1所述的SNP分子标记的产品， 其特征在于， 所述产品包括引物对， 所述引物对为KAS P引物对； 所述KASP引物对的核苷酸序列为： 上游引物F1  ： 5’ ‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTA ATGTACGTGTGACGTG GCG  ‑3’； 上游引物F2  ： 5’ ‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAATGTACGTGTGACGTG GCA‑3’； 下游引物R  ： 5’ ‑CATTCCACTCGCA ACCAATG‑3’； 或 上游引物F1:  5’ ‑  GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCA ATGTCGCCGTCGGTAAT‑3’； 上游引物F2:  5’ ‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAATGTCGCCGTCGGTAAC‑3’； 下游引物R： 5 ’ ‑TTCCCCATAATCTAACATTTCCTAT‑3’。 4.权利要求3所述的产品在南瓜 基因分型或品种选 育中的应用。 5.一种辨别南瓜品种的方法， 包括如下步骤： 提取待测南瓜核酸样品， 使用权利要求3所述的产品进行检测， 根据SNP位点的检测情 况判定南瓜品种。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特 征在于， 检测体系为： 权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114606339 B 2与南瓜肌醇含量主 效QTL连锁的KASP分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子检测技术及南瓜遗传育种技术领域， 具体涉及与南瓜肌醇含量主 效QTL连锁的KAS P分子标记及其应用。 背景技术 [0002]南瓜属葫芦科植物， 是一种可药食两用的蔬菜。 南瓜含有一些特异性的功能代谢 物， 如多糖、 肌醇、 甘露醇、 生物碱、 葫芦巴碱等。 相关技术中， 南瓜正在作为特效保健食品和 功能蔬菜进行开发， 而且开发前景可观。 南瓜的一些成分， 如多糖和肌醇， 对糖尿病具有良 好食疗效果。 肌醇包括肌 ‑肌醇和D‑手性肌醇， 它们在胰岛素作用的信号传递中起重要作 用。 相关技术中发现正常人血液及尿液中含有一定浓度的肌醇， 而II型糖尿病人中则几乎 检测不到肌醇。 其中， D ‑手性肌醇对II型糖尿病具有更加显著疗效， 而肌 ‑肌醇除其降糖功 能， 也是动物重要的生长因子， 是国际婴儿配方奶粉的添加物之一， 同时也广泛应用于饲 料、 医药和化妆品等行业。 [0003]单核苷酸多态性位点(Single  Nucleotide  Polymorphism， SNP)是新一代的分子 标记， 在植物的基因组中出现的频率十 分高， 通过基因组测序来检测SNP是一种高效的检测 群体内变异情况的手段。 其中， 用QTL  mapping的方法对数量性状进行遗传分析， 鉴定相关 性状的控制位点， 从而可以有效确定哪些位点可以作为辅助育种的分子标记。 竞争性等位 基因特异性PCR(Kompetitive  Allele Specific  PCR， KASP)是对SNPs和特定位点上的 InDels进行精准的双等 位基因判断的方法， 被广泛应用于对SNP的标记开发。 发明内容 [0004]本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。 为此， 本发明提出一 种与南瓜肌 醇含量主效QTL连锁的KASP分子标记及其应用， 通过该SNP分子标记能够 有效检 测出高肌醇含量的南瓜品种， 从而为 南瓜品种的选 育提供有力的技 术支持。 [0005]本发明的第一个方面， 提供SNP分子标记， 所述SNP分子标记为(1)～(2)中的至少 一种： [0006](1)位于中国南瓜15号染色体上第245970 6位碱基， 其碱基为G或A； [0007](2)位于中国南瓜15号染色体上第2715 672位碱基， 其碱基为T或C； [0008]所述SNP分子标记位于南瓜肌醇含量连锁的主效QTL 位。 [0009]在本发明的一些实施方式中， 所述(1)为SNP分子标记340813， 所述(2)位SNP分子 标记341335。 上述两个SNP分子标记定位于中国南瓜15号染色体上， 分别位于肌醇基因两 侧。 [0010]在本发明的一些实施方式中， 所述(1)位于SEQ  ID NO： 1所示序列自5 ’端起第150 位碱基。 [0011]在本发明的一些实施方式中， 所述(2)位于SEQ  ID NO： 2所示序列自5 ’端起第150 位碱基。说　明　书 1/7 页 3 CN 114606339 B 3