(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210311058.2 (22)申请日 2022.03.28 (71)申请人 上海海洋大学 地址 201306 上海市浦东 新区沪城环路9 99 号 (72)发明人 沈玉帮　郭加民　李家乐　王元浩　 (74)专利代理 机构 上海伯瑞杰知识产权代理有 限公司 312 27 专利代理师 周一新 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G16B 20/20(2019.01) (54)发明名称 一种与青鱼生长相关QTL紧密连锁的分子标 记及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种 与青鱼生长相关QTL紧密 连锁的分子标记及其应用， 其包括分子标记 snp8107和snp9562， 其中snp8107具有长度为 437bp且核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示 的靶序 列， 在第163位核苷酸存在一个A/G  SNP位点； snp9562具有长度为274bp且核苷酸序列如SEQ   ID NO:2所示的靶序列， 在第172位核苷酸存在一 个G/A SNP位点。 本发明中筛选并鉴定出与青鱼 生长相关QTL紧密连锁的分子标记， 可以用于筛 选具有优势 基因型的青 鱼个体， 具有简便、 高效、 准确和特异性较高的优势， 用于青 鱼的标记辅助 育种可以大 大节约养殖成本， 提高育种效率。 权利要求书2页 说明书7页 附图1页 CN 114807382 A 2022.07.29 CN 114807382 A 1.一种与青鱼生长相关QTL紧密 连锁的分子标记， 包括分子标记snp8107和snp9562， 其 中： 分子标记snp8107具有长度为437bp且核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示的靶序列， 在第 163位核苷酸存在一个A/G  SNP位点； 分子标记snp9562具有长度为274bp且核苷酸序列如 SEQ ID NO:2所示的靶序列， 在第172位核苷酸存在一个G/A  SNP位点。 2.根据权利要求1所述与青鱼生长相关QTL紧密连锁 的分子标记， 其特征在于， 所述分 子标记snp8107的上游引物序列如SEQ  ID NO:3所示， 下游引物序列如SEQ  ID NO:4所示； 所 述分子标记snp9562的上游引物序列如SEQ  ID NO:5所示， 下游引物序列如SEQ  ID NO:6所 示。 3.权利要求1或2所述与青鱼生长相关QTL紧密连锁 的分子标记 的筛选方法， 其特征在 于， 包括以下步骤： (1)选择正常生长且无畸形的雌雄青鱼作为健康 的青鱼亲本， 注射激素催熟人工受精 构建青鱼群 体； (2)对上述青鱼群体包含体重、 体长、 体宽和体高的表型性状进行测量， 并在青鱼尾部 剪取8‑12cm2的鳍条组织， 置 于装有无 水乙醇的离心管内并于 ‑20℃保存； (3)采用JionMap和MapQTL两个软件进行QTL定位， 前者计算各个标记的位置信息， 后者 计算与体质量相关的QTL区间， 在效应最高的QTL区间内得到与青鱼体质量相关的分子标 记， 即得。 4.根据权利要求3所述与青鱼生长相关QTL紧密连锁的分子标记的筛选方法， 其特征在 于， 步骤(1)中， 采用的激素为 绒毛膜促 性腺激素类似物LRH ‑A和地欧酮 DOM的混合物。 5.根据权利要求3所述与青鱼生长相关QTL紧密连锁的分子标记的筛选方法， 其特征在 于， 步骤(2)中， 青 鱼群体的体重采用精确到0.1 g的电子天平测量， 体长、 体宽和体高采用精 确到0.1cm的直尺测量。 6.权利要求1或2所述与青鱼生长相关QTL紧密连锁的分子标记在辅助检测青鱼体质量 性状中的应用。 7.权利要求1或2所述与青鱼生长相关QTL紧密连锁的分子标记在青鱼标记辅助育种中 的应用。 8.一种筛选青鱼品种的方法， 其特征在于， 通过权利要求1或2所述与青鱼生长相关QTL 紧密连锁的分子标记实现， 包括以下步骤： (a)采集待测青鱼的鳍条组织， 即在青鱼尾部剪取8 ‑12cm2的鳍条组织， 置于装有无水乙 醇的离心管内并于 ‑20℃保存， 并提取基因 组DNA； (b)以待测青鱼的基因组DNA为模板， 采用如SEQ  ID NO:3‑6所示的引物对分别进行PCR 扩增， 得到PCR扩增产物； (c)对上述PCR扩增产物用一代Sanger测序后， 用Senquencher软件观察测序峰图进行 SNP分型， 得到与青鱼体质量相关的基因型； (d)结合青鱼包含体重、 体长、 体宽和体高的表型形状数据与上述与青鱼体质量相关的 基因型结合进行多重比较， 得到与青鱼体质量相关的优势基因型， 选择青鱼品种。 9.根据权利要求8所述筛 选青鱼品种的方法， 其特 征在于， 步骤(a)中， 采用天根海洋生物组织DNA提取 试剂盒提取基因 组DNA； 和/或 步骤(b)中， PCR扩增的反应体系为25μL反应体系， 为12.5μL的2 ×Taq PCR Master 权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114807382 A 2Mix、 8.5 μL的ddH2O、 2 μL的DNA模板和各1μL的上、 下游引物； PCR扩增的过程为： 94℃预变性 3min； 94℃变性30sec； 退火； 72℃延伸30s； 30个循环； 72℃延伸10min； 4℃保存； 其中np810 7 的退火温度为5 5.5℃， snp95 62的退火温度为5 6.4℃。 10.根据权利要求8所述筛选青鱼品种的方法， 其特征在于， 步骤(d)中， 与邗江青鱼体 质量相关的优势基因型为由snp8107的AA和snp9562的GA组成的二倍型， 与湘江青鱼体质量 相关的优势基因型为由snp8107的AG和snp95 62的AA组成的二 倍型。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114807382 A 3