(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210316240.7 (22)申请日 2022.03.28 (71)申请人 茅台学院 地址 564500 贵州省仁怀市鲁班大道 (72)发明人 安焱林　陶玲玲　张丰　喻仕瑞　 李雪琪　 (74)专利代理 机构 重庆强大凯创专利代理事务 所(普通合伙) 50217 专利代理师 陈雍 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种利用InDel分子标记 鉴别茶树大小叶品 种的方法 (57)摘要 本发明涉及分子生物学技术领域， 涉及一种 基于分子标记的经济作物品种鉴别方法， 具体涉 及一种利用InDel 分子标记鉴别茶树大小叶品种 的方法。 所述InDel分子标记 的上游核苷酸序列 如SEQ ID NO.1所示， 所述InDel分子 标记的下游 核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 检测方法包括 以下依次进行的步骤： S1： 提取待测茶树样本中 的总DNA， 获得待扩增DNA； S2： 使用F1和R1对待扩 增DNA进行PCR扩增， 获得扩增产物； S3： 对所述扩 增产物进行电泳检测。 本技术方案在分子生物学 领域对大叶种茶树和小叶种茶树进行鉴别， 解决 了传统的大小叶种茶的鉴别方法繁琐且不准确 的技术问题， 具有广阔的应用前 景。 权利要求书1页 说明书14页 序列表2页 附图2页 CN 114561487 A 2022.05.31 CN 114561487 A 1.一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 其特征在于： 所述InDel分子 标记的上游核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述InDel分子标记的下游核苷酸序列如SEQ   ID NO.2所示。 2.根据权利要求1所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 其特征 在于： 用于检测所述InDel分子标记的引物对包括序列如SEQ  ID NO.3所示的F1以及序列如 SEQ ID NO.4所示的R 1。 3.根据权利要求2所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 其特征 在于： 包括以下依次进行的步骤： S1： 提取待测茶树样本中的总DNA， 获得待扩增DNA； S2： 使用F1和R 1对待扩增DNA进行PCR扩增， 获得扩增产物； S3： 对所述扩增产物进行电泳检测。 4.根据权利要求3所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 其特征 在于： 在S3中， 所述电泳检测为毛细管电泳检测。 5.根据权利要求4所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 其特征 在于： 在S3中， 电泳检测结果显示仅在700bp  DNA marker附近出现条带， 则待测茶树样 本为 纯合的大叶品种； 电泳检测结果显示仅在500bp  DNA marker附近出现条带， 则待测茶树样 本为纯合的小叶品种； 电泳检测结果显示在700bp和500bp  DNA marker附近出现条带， 则待 测茶树样本为大叶品种和小叶品种的杂合品种。 6.根据权利要求5所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 其特征 在于： 在S1中， 使用CTAB法提取待测茶树样本中的总DNA。 7.根据权利要求6所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 其特征 在于： 在S2中， PCR扩增的程序为： 94℃预变性5min、 30个循环、 72℃延伸10min、 4℃保存； 在 30个循环中， 每个循环的程序为： 94℃变性30s、 退火30s、 72℃延伸50s； F1和R1的退火温度 均为58℃。 8.根据权利要求7所述的一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 其特征 在于： 在S2中， PCR扩增的反应体系为： 50ng/μL 的DNA溶液1μL、 10μM的F1  0.5μL、 10μM的R1   0.5 μL、 2×Taq MasterMix酶5 μL、 双蒸水3 μL。 9.一种茶树的InDel分子标记， 其特征在于： 所述InDel分子标记位于舒茶早基因组2号 染色体的基因CS S0006562的终止密码子下游13 5bp处， 长度为184bp。 10.根据权利要求9所述的I nDel分子标记在鉴别茶树大小叶品种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114561487 A 2一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学技术领域， 涉及一种基于分子标记的经济作物品种鉴别方 法， 具体涉及一种利用I nDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法。 背景技术 [0002]茶是世界三大无酒精饮料之一， 因其丰富的口感、 悦人的香气和较高的保健价值 而深受人们的喜爱。 我国是茶树主产国之一， 截至2020年底， 18个主要产茶省(自治区、 直辖 市)茶园总面积约4747.69万亩， 产量在297万吨以上。 茶产业已经成为广大丘陵山区脱贫攻 坚的支柱产业。 叶片是植物最重要的营养器官， 其通过光合作用和呼吸作用提供植物生长 发育所需要的能量， 同时储存有机物和矿质营养。 对于茶树(Camellia  sinensis(L.) O.Kuntze)而言， 叶片还是主要的经济收获物。 在我国西南和华南茶区， 阿萨姆变种 (Camellia  sinensis var.Assamica， CSA， 又称为大叶种)和中国变种(Camellia  sinensis  var.Sinensis， CSS， 又称为小叶种)茶树均有广泛栽培。 而在江南和江北等茶区， 由于冬季 漫长且气温较低， 导致阿萨姆变种茶树无法适应低温而死亡， 因而以栽培中国变种茶树为 主。 两者无论在品质、 形态和抗逆性均具有显著差异， 其中最明显的是， 阿萨姆变种茶树(乔 木、 小乔木为主)比中国变种茶树(灌木为主)具有更大的叶面积。 然而， 造成茶树叶片差异 发育的关键突变位点或者调控因子尚未被成功鉴定。 目前， 对于茶树叶片发育机制的研究 仍然较少。 An等人通过全基因组重测序和图谱整合技术， 以 “金萱”和“云茶1号”杂交产生的 96份F1代材料为基础构建了一张高密度遗传图谱， 并在茶树2号染色体上鉴定到25个可能 与叶面积相关的潜在QTL位点。 但这些潜在的位点距离进一步的应用还有较大差距。 目前， 还没有高效快速的分子标记能够快速对阿萨姆变种和中 国变种茶树进 行准确的鉴定。 现有 技术通常采用目测以及用工具测量叶片大小的方法。 但是人为划分大小叶的范围， 该方法 及其不准确， 这对于茶树品种的鉴定和消费者权益的保护， 都是十分不利的。 因此， 开发能 快速对阿萨姆变种和小叶变种鉴定的标记对促进茶树功能基因、 分子标记辅助育、 茶树亲 子关系鉴定和品种权保护都具有重要意 义。 发明内容 [0003]本发明意在提供一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 以解决传 统的大小叶种茶的鉴别方法繁琐且不 准确的技 术问题。 [0004]为达到上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0005]一种利用InDel分子标记鉴别茶树大小叶品种的方法， 所述InDel分子标记的上游 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述InDel分子标记的下游核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所 示。 [0006]本方案还提供了一种茶树的InDel分子标记， 所述InDel分子标记位于舒茶早基因 组2号染色体的基因CS S0006562的终止密码子下游13 5bp处， 长度为184bp。 [0007]本方案还提供了一种I nDel分子标记在鉴别茶树大小叶品种中的应用。说　明　书 1/14 页 3 CN 114561487 A 3