(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210311631.X (22)申请日 2022.03.28 (71)申请人 浙江省农业科 学院 地址 310021 浙江省杭州市石桥路198号 (72)发明人 虞慧芳　顾宏辉　王建升　沈钰森　 盛小光　 (74)专利代理 机构 成都知棋知识产权代理事务 所(普通合伙) 51325 专利代理师 马超前 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6858(2018.01) (54)发明名称 与西兰花花球低温变紫性状连锁的InDel标 记物及引物组和应用 (57)摘要 本发明公开了一种与西兰花花球低温变紫 性状连锁的InDel标记物及引物组和应用， 该 InDel标记物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示， 该InDel标记物与 西兰花花球低温变紫性状紧密 连锁， 其物理位置为Chr9.60169854。 本发明的与 西兰花花球低温变紫性状连锁的InDel标记可应 用于西兰花花球低温紫/绿性状的辅助选择， 可 在早期对育种材料进行批量检测， 从而可在早期 淘汰大量非理想的材料， 检测方便， 费用低廉， 大 幅度减少后期所需的定植、 田间管理、 表型鉴定 的工作量。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图1页 CN 114836558 A 2022.08.02 CN 114836558 A 1.一种与西兰花花球低温变紫性状连锁的InDel标记物， 其特征在于， 该InDel标记物 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示， 该InDel标记物与西兰花花球低温变紫性状紧密连锁， 其物理位置为C hr9.60169854。 2.一种与西兰花花球低温变紫性状连锁的InDel标记引物 组， 其特征在于， 该引物 组包 含： 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示的特异性引物Primer  F、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所 示的特异性引物Primer  H， 和核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的通用引物Primer  C。 3.根据权利要求2所述的InDel标记引 物组， 其特征在于， 所述特异性引 物Primer  F和 特异性引物Pr imer H的5’端接上不同的荧光序列， 该荧光序列分别为FAM荧光序列和HEX荧 光序列。 4.根据权利要求3所述的InDel标记引物组， 其特征在于， 所述FAM荧光序列如SEQ  ID  NO.4所示。 5.根据权利要求3所述的InDel标记引物组， 其特征在于， 所述HEX荧光序列如SEQ  ID  NO.5所示。 6.一种如权利要求2 ‑5中任意一项所述的InDel标记引物组的应用， 其特征在于， 该应 用选自以下任意 一种： (1)在鉴别西兰花 花球低温变紫、 低温 持绿性状中的应用； (2)在西兰花分子标记辅助育种中的应用。 7.一种鉴别西兰花 花球低温变色性状的方法， 其特 征在于， 该 方法包含： 采用如权利要求2 ‑5中任意一项所述的InDel标记引 物组， 以待检测西蓝花的DNA基因 组为模板， 进行 KASP反应， 根据结果分析西兰花 花球低温变色性状： 若仅有如SEQ  ID NO.6所示的核苷酸序列的插入的扩增产物， 则待检测西蓝花的花球 表现低温发紫； 若仅有无如SEQ  ID NO.6所示的核苷酸序列插入的扩增产物， 则待检测西蓝花的花球 表现低温 持绿； 若既有如SEQ  ID NO.6所示的核苷酸序列的插入的扩增产物， 又有无如SEQ  ID NO.6所 示的核苷酸序列插 入的扩增产物， 则待检测西蓝花的花球表现低温发紫。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114836558 A 2与西兰花 花球低温变紫性状连锁的InDel标记物及引物组和 应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种与西兰花花球低温变紫性状连锁的InDel标记， 具体涉及一种与 西兰花花球低温变紫 性状连锁的I nDel标记 物及引物组和应用。 背景技术 [0002]西兰花(Brassica  oleracea  L.var.italica)是十字花科芸薹属甘蓝种中以花球 为产品的一个变种， 因营养丰富且富含萝卜硫素而深受人们的青睐， 近年栽培面积逐年增 长。 西兰花在生产中常出现遇低温花球发紫的现象， 影响商品花球外观品质。 [0003]研究表明植物紫色是甜菜红色素或花青素的色素显示(Biosynthesis  of plant  pigments:anthocyanins,betalains  and carotenoids.Plant  J.2008； 54:733 –49； "La  vie en rose":biosynthesis,sources,and  applications  of Betalainpigments.Mol   Plant.2018； 11(1):7 –22； Illuminating  colors:regulation  of carotenoid   biosynthesis  and accumulation  by light.Curr  Opin Plant Biol.2017； 37:49 –55)。 甜 菜红色素呈现红紫或黄 色， 仅存在于石竹目植物中； 花青素在许多不同植物种普遍存在， 呈 现从红到紫到蓝的颜色(Outchkourov  NS,Karlova  R, M,Schrama  X,Blilou  I, Jongedijk  E,et al.Transcription  factor‑mediated  control of anthocyanin   biosynthesis  in vegetative  tissues.J  Plant Physiol.2018； 176(2):1862 –78.)。 对芸 薹属植物鲜明紫色的研究结果表明， 芸薹属植物中鲜艳紫色是转录因子MYB的表达增强引 起的(The  purple cauliflower  arises from activation  of a MYB transcription   factor.Plant  Physiol.2010； 154(3):1470 –80； Purple  Brassica  oleracea   var.capitata  F.rubra is due to the loss ofBoMYBL2 ‑1 expression.BMC  Plant  Biol.2018； 18 :82–97)。 [0004]目前， 西兰花花球低温发紫性状的研究不多， 鲜见与该性状紧密连锁的位点或标 记的研究报道。 西兰花花球低温持绿是长期以来的育种方向之一。 因此， 挖掘并开 发控制西 兰花花球低温变紫基因及相关分子标记具有重要的生产应用价值和现实意义， 并为聚合西 兰花低温 持绿优良位 点、 培育耐低温的西兰花 新品种及材 料鉴定等 提供技术支撑。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种与西兰花花球低温变紫性状连锁的InDel标记物及引物 组和应用， 能够对西兰花材料进行检测， 可早期、 快速、 精准的检测西兰花花球低 温变紫材 料， 利用KAS P技术对所开发的I nDel标记进行基因分型。 [0006]为了达到上述目的， 本发明提供了一种与西兰花花球低温变紫性状连锁的InDel 标记物， 该InDel标记物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示， 该InDel标记物与西 兰花花球低 温变紫性状紧密连锁， 其物理位置为C hr9.60169854。 [0007]本发明的另一目的是提供一种与西兰花花球低温变紫性状连锁的InDel标记引物说　明　书 1/4 页 3 CN 114836558 A 3