(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210324556.0 (22)申请日 2022.03.29 (71)申请人 上海市同济医院 地址 200333 上海市普陀区新村路389号 (72)发明人 蒋明　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 田立媛 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测人源性Nur77基因表达水平的 引物组合物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测人源性Nur77基 因表达水平的引物组合物及其应用， 属于基因检 测技术领域。 本发明公开的一种用于检测人源性 Nur77基因表达 水平的引物组合物， 由用于Nur77 基因检测的引物组1和用于RPL19内参基因检测 的引物组2组成； 用于筛选RNA干扰序列。 本发明 用于检测人源性Nur77基因表达水平的方法， 特 异性强、 检测敏 感性高、 操作方便简单、 准确度更 高、 检测时间短。 权利要求书1页 说明书6页 序列表4页 附图4页 CN 115011688 A 2022.09.06 CN 115011688 A 1.一种用于检测人源性Nur77基因表达水平的引物组合物， 其特征在于， 由引物组1和 引物组2组成； 所述引物组1用于Nur7 7基因检测， 所述引物组2用于RPL19内参基因检测； 所述引物组1的序列如下： Nur77‑F： 5’ ‑ACTGGATACACCCGTGACCT‑3’； SEQ ID NO.1； Nur77‑R： 5’ ‑TTTCTGCACTGTGCGCT TGA‑3’； SEQ ID NO.2； 所述引物组2的序列如下： RPL19‑F： 5’ ‑CTCGATGC CGGAAAAACACC‑3’； SEQ ID NO.3； RPL19‑R： 5’ ‑TTCTCTGGCATTCGGGCATT‑3’； SEQ ID NO.4。 2.根据权利要求1所述的一种用于检测人源性Nur77基因表达水平的引物 组合物， 其特 征在于， 所述引物组1的上游和下游引物浓度均为0.1 ‑0.5 μM。 3.根据权利要求1所述的一种用于检测人源性Nur77基因表达水平的引物 组合物， 其特 征在于， 所述引物组2的上游和下游引物浓度均为0.1 ‑0.5 μM。 4.权利要求1 ‑3任一项所述的引物组合物在检测人源性Nur77基因表达水平的试剂中 的应用。 5.权利要求1 ‑3任一项所述的引物组合物在筛 选RNA干扰序列中的应用。 6.根据权利要求5所述的引物 组合物在筛选RNA干扰序列中的应用， 其特征在于， 采用2 ‑△△CT相对定量方法计算不同RNA干扰序列样品的Nur77基因表达水平， 筛选出表达水平 最低 的RNA干扰序列。 7.一种用于检测人源性Nur77基因表达水平的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求1 ‑3 任一项所述的引物组合物和荧 光染料。 8.根据权利要求7所述的一种用于检测人源性Nur77基因表达水平的试剂盒， 其特征在 于， 所述荧光染料为SYBR  Green荧光染料。 9.一种非诊断治疗目的的用于检测人源性Nur77基因表达水平的方法， 其特征在于， 包 括如下步骤： (1)提取样品RNA； (2)将步骤(1)提取 出的RNA反转录成cDNA； (3)以权利要求1 ‑3中任一项所述的引物组合物为引物， 用荧光定量PCR法检测Nur77基 因以及RPL19内参基因表达水平； (4)分析结果。 10.根据权利要求9所述的一种非诊断治疗目的的用于检测人源性Nur77基因表达水平 的方法， 其特征在于， 步骤(3)中荧光定量PCR反应条件为： 95℃预变性5min； 95℃变性10s， 60℃退火40s运行40个 循环； 最后40℃10s结束反应。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115011688 A 2一种用于 检测人源性Nu r77基因表达水 平的引物组合物及其 应用 技术领域 [0001]本发明涉及基因检测技术领域， 更具体的说是涉及一种用于检测 人源性Nur77基 因表达水平的引物组合物及其应用。 背景技术 [0002]Nur77(又称为TR3， N R4A1， NAK ‑1， NGFI‑B)是一种孤儿核受体， 由立早基因编 码， 能 够对包括细胞应激在内的多种信号通路产生响应。 Nur77参与的生物学过程包括细胞增殖， 分化， 凋亡， 自噬， 迁移侵袭， 代谢和炎症等方面。 Nur77能够被多种细胞生长因子以及凋亡 诱导因子表达， 同时Nur77的蛋白修饰也显著影响Nur77的功能。 不仅如此， Nur77还能够通 过与其他蛋白的相互作用来调控生物功能的改变。 总而言之， Nur77通过复杂的调控网络发 挥着多种多样的生物学功能。 [0003]Nur77在肿瘤发展过程中发挥促增殖， 促凋亡的双重作用。 Nur77在结肠癌， 乳腺 癌， 前列腺癌等多种癌症中高表达， Nur77作为新颖的抗癌药物靶点， 对其潜在调控分子的 研究具有重大的意 义。 [0004]阿尔茨海默病(Alzheimer ’s disease， AD)是以进行性认知功能障碍和行为损 害 为特征的中枢神经系统退行性病变。 其 典型组织病理学改变为脑内的淀粉样蛋白沉积和神 经元纤维缠结。 研 究表明脑内Nur77的表达是维持正常的认知功能所必须的， 抑制Nur77的 转录活性会导致长时记忆的严重损伤， 对模拟AD的转基因动物模型 的研究表明， 进行性淀 粉样蛋白沉积会导致Nur77表达水平 明显不足。 此外， 研 究表明AD病人外周血Nur77基因表 达水平明显下调 。 帕金森病(PD)细胞模型中， 核孤儿受体Nur77激动剂真菌 聚酮(Csn ‑B)对 帕金森病神经细胞产生保护作用。 一些对疾病的干预和治疗措施 也可影响Nur77的表达， 因 此通过对Nur7 7表达水平的研究有助于明确疾病的发病机制和药物的药效机制。 [0005]对Nur77表达水平的研究除采用免疫组化和Western免疫印迹等方法从蛋白水平 进行研究外， 也可从mRNA水平研究Nur77的表达水平， 包括半定量反转录PCR和荧光定量P CR 方法等。 以蛋白为检测目标的方法通常操作比较繁琐， 耗时。 半定量反转录PCR需要电泳检 测， 准确度不够高。 细胞管家基因需选择维持细胞最低限度功能所不可少的基因， 在所有细 胞中均要表达的一类基因， 且表达水平受环境因素影响较小。 有研究表明比较 常用的actin 管家基因 受内质网应激影响， 表达量会 减少， 不适宜用于内质网应激的参 考基因。 [0006]因此， 提供一种用于检测 人源性Nur77基因表达水平的引物组合物及其应用是本 领域技术人员亟需解决的问题。 发明内容 [0007]有鉴于此， 本发明提供了一种用于检测人源性Nur77基因表达水平的引物组合物 及其应用。 [0008]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案：说　明　书 1/6 页 3 CN 115011688 A 3