(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210318110.7 (22)申请日 2022.03.29 (71)申请人 广西壮族自治区兽医研究所 地址 530001 广西壮 族自治区南宁市友爱 北路51号广西兽医研究所 (72)发明人 谢芝勋　谢志勤　张艳芳　范晴　 谢丽基　万丽军　罗思思　李孟　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 关畅 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测禽脑脊髓炎病毒的组合物及其应用 (57)摘要 本发明公开了检测禽脑脊髓炎病毒的组合 物及其应用， 属于微生物的测定或检验方法其所 用的组合物 技术领域。 本发明提供检测或辅助检 测禽脑脊髓 炎病毒的组合物， 所述组合物包括禽 脑脊髓炎病毒特异引物探针， 所述禽脑脊髓炎病 毒引物探针包括引物AEV ‑F和引物AEV ‑R、 探针 AEV‑Probe， 所述引物A EV‑F为核苷酸序列是序列 表中SEQ ID No.2的单链DNA； 所述引物AEV ‑R为 核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.3的单链DNA； 所述探针AEV ‑Probe的核苷酸序列是序列表中 SEQ ID No.4。 特异性和灵 敏性测定 结果表明， 本 发明提供的组合物灵敏性高， 特异性强， 适用于 低拷贝样品的检测。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图3页 CN 114703325 A 2022.07.05 CN 114703325 A 1.检测或辅助检测禽脑脊髓炎病毒的组合物， 其特征在于： 所述组合物包括禽脑脊髓 炎病毒特异引物探针， 所述禽脑脊髓炎病毒引物探针包括引物 AEV‑F和引物AEV‑R、 探针AEV ‑Probe， 所述引物 AEV‑F为核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.2的单链DNA； 所述引物 AEV‑R为核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.3的单链DNA； 所述探针AEV ‑Probe的核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.4。 2.根据权利要求1所述 的组合物， 其特征在于： 所述AEV ‑F、 AEV‑R、 AEV‑Probe的物质的 量比值为2:2:1。 3.根据权利要求1或2所述的组合物， 其特 征在于： 所述组合物还 包括阳性标准品质粒。 4.根据权利要求3所述的的组合物， 其特征在于： 所述阳性标准品质粒包括核苷酸序列 如SEQ ID No.1所示的DNA分子 。 5.权利要求1 ‑3中任一项所述的组合物在检测或辅助检测禽脑脊髓炎病 毒或/和， 制备 检测或辅助检测禽脑脊髓炎病毒的产品中的应用。 6.权利要求1 ‑3中任一项所述的组合物在检测或辅助检测待测样本是否感染禽脑脊髓 炎病毒或/和， 制备检测或辅助检测待测样本是否感染禽脑脊髓炎病毒的产品中的应用。 7.权利要求1 ‑3中任一项所述的组合物在检测或辅助检测待测病原是否为禽脑脊髓炎 病毒或/和制备检测或辅助检测待测病原是否为 禽脑脊髓炎病毒的产品中的应用。 8.检测或辅助检测禽脑脊髓炎病 毒的方法， 其特征在于： 所述方法包括用权利要求1 ‑3 中任一项 所述的组合物对待测样品进行数字P CR， 根据数字PCR产 物确定或辅助确定待测样 品是否为 禽脑脊髓炎病毒或， 是否含有禽脑脊髓炎病毒或， 是否感染禽脑脊髓炎病毒。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于： 所述数字PCR中采用的PCR体系中所述AEV ‑ F、 AEV‑R、 AEV‑Probe的物质的量比值 为2:2:1。 10.根据权利要求8或9所述的方法， 其特征在于： 所述数字PCR中采用的引物退火条件 为58℃1分钟。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114703325 A 2检测禽脑脊髓炎病毒 的组合物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于微生物的测定或检验方法其所用的组合物技术领域， 具体涉及检测禽 脑脊髓炎病毒的组合物及其应用。 背景技术 [0002]禽脑脊髓炎(avian  encephalomyelitis,AE)又称流行性震颤， 是由禽脑脊髓炎病 毒(avian  encephalomyelitis  virus,AEV)引起的青年鸡、 雉鸡、 鹌鹑和火鸡的一种急性、 高度接触性传染病。 该病通过消化道感染家禽， 侵害鸡的中枢神经系统和其它实质性器官， 病毒经蛋垂直传播， 导致孵化率下降， 感染雏鸡在1 ‑7日龄出现震颤、 运动失调等症状， 随着 鸡日龄的增长， 这些临床神经症状慢慢不表现。 另外， 病毒感染产蛋鸡， 可导致产蛋鸡产蛋 量轻微下降， 对养禽业尤其是种禽饲养业危害极大。 因此在产业中建立检测APV的方法具有 重要的现实意 义。 发明内容 [0003]本发明要解决的技 术问题是如何实现低滴度禽脑脊髓炎病毒的检测。 [0004]为解决上述技术问题， 第一个方面， 本发明提供一种检测或辅助检测禽脑脊髓炎 病毒的组合物， 所述组合物包括禽脑脊髓炎病毒特异引物探针， 所述禽脑脊髓炎病毒引物 探针包括引物 AE‑F和引物AE‑R、 探针AE ‑Probe， [0005]所述引物 AE‑F为核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.2的单链DNA； [0006]所述引物 AE‑R为核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.3的单链DNA； [0007]所述探针AE ‑Probe的核苷酸序列是序列表中SEQ  ID No.4。 [0008]进一步地， 上述的组合物中， 所述AE ‑F、 AE‑R、 AE‑Probe的物质的量比值 为2:2:1。 [0009]进一步地， 上述的组合物中， 所述组合物还 包括阳性标准品质粒。 [0010]进一步地， 上述的的组合物中， 所述阳性标准品质粒包括核苷酸序列如SEQ  ID  No.1所示的DNA分子 。 [0011]进一步地， 上述的组合物中， 所述引物探针可 单独包装或混合包 装。 [0012]进一步地， 上述的组合物中， 所述阳性标准品质粒 单独包装。 [0013]本发明中， 所述AE ‑Probe为特异性识别禽脑脊髓炎病毒的探针， 所述AE ‑Probe的 5'端连接有荧 光基团， 3'端连接有淬灭基团。 [0014]荧光基团可选自但不限于FAM(5/6 ‑羧基荧光素)、 VIC(绿色荧光蛋白)、 TET(四氯 ‑ 6‑羧基荧光素)、 JOE(2， 7 ‑二甲基‑4， 5‑二氯‑6‑羧基荧光素)、 HEX(六氯 ‑6‑甲基荧光素)、 Cy3、 TAMRA(6‑羧基四甲基若丹明)、 ROX(羧基 ‑X‑罗丹明)、 Texas  Red、 LC RED640、 Cy5(花菁 染料)、 LC  RED705、 FITC(异硫氰酸荧光素)等常见荧光基团， 进行双重PCR检测引物组合物 中探针的荧 光基团的选择原则是两个荧 光的显色不同即可。 [0015]所述淬灭基团可选自TAMRA、 BHQ1、 BHQ2、 BHQ3、 MGB、 Dabcy1中的至少一种。 [0016]为解决上述技术问题， 第二个方面， 本发明提供上述的组合物在下述A1) ‑A6)中的说　明　书 1/7 页 3 CN 114703325 A 3