(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210317420.7 (22)申请日 2022.03.29 (71)申请人 河南兰德施坦纳基因科技有限公司 地址 453000 河南省新乡市高新区高新 东 路999号生命 科学产业城CMO示范园G2 号楼1层北区 (72)发明人 胡志超　王光辉　郭秀明　赵建晴　 孙妮娜　 (74)专利代理 机构 成都弘毅天承知识产权代理 有限公司 5123 0 专利代理师 轩勇丽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6881(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测人类红细胞Rh血型基因分型的引 物组、 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明公开了一种检测人类红细胞Rh血型 基因分型的引物组、 试剂盒及应用， 所述引物组 的序列表如SEQ  ID No.1‑9、 SEQ ID No.10‑12 或/和SEQ ID No.13‑15、 SEQ ID No.16‑18或/和 SEQ ID No.19‑21、 SEQ ID No.22‑24或/和SEQ   ID No.25‑27、 SEQ ID No.28‑30、 SEQID  No.31‑ 33或/和SEQ  ID No.34‑36、 SEQ ID No.37‑72所 示。 引物经过了优化设计， 具有相似的退火温度， 能够实现所有引物在相同的PCR扩增条件下同时 扩增， 每个PCR反应体系的体积只有1.15μL， DNA 模板只需5～10ng， 大大增加了检测效率和反应 灵敏度； 应用该引物组进行检测， 具有速度快、 成 本低、 灵敏性高及易于实现多位点联合检测等优 点。 权利要求书4页 说明书19页 序列表12页 附图7页 CN 114507724 A 2022.05.17 CN 114507724 A 1.一种检测人类红细胞Rh血型基因分型的引物组， 其特征在于， 所述引物组的序列表 如SEQ ID No.1‑9、 SEQ ID No.10‑12或/和SEQ  ID No.13‑15、 SEQ ID No.16‑18或/和SEQ   ID No.19‑21、 SEQ ID No.22‑24或/和SEQ  ID No.25‑27、 SEQ ID No.28‑30、 SEQ ID No.31‑ 33或/和SEQ  ID No.34‑36、 SEQ ID No.37‑72所示。 2.根据权利要求1所述的一种检测人类红细胞Rh血型基因分型的引物 组， 其特征在于， 所述引物组及其对应的检测位 点分别为： 第一组引物如序列表SEQ  ID No.1‑3所示， 用于检测upstream  Rhesus box 5’端基因 和/或downstream Rhesus box 5’端基因的信息； 第二组引物如序列表SEQ  ID No.4‑6所示， 用于检测upstream  Rhesus box3’端基因 和/或downstream Rhesus box 3’端基因的信息； 第三组引物如序列表SEQ  ID No.7‑9所示， 用于检测RHD基因和/或RHCE基因中的第一 外显子信息； 第四组引物如序列表SEQ  ID No.10‑12所示或第 五组引物如序列表SEQ  ID No.13‑15 所示， 用于检测RHD基因和/或RH CE基因中的第三外 显子信息； 第六组引物如序列表SEQ  ID No.16‑18所示或第七组引物如序列表SEQ  ID No.19‑21 所示， 用于检测RHD基因和/或RH CE基因中的第四外 显子信息； 第八组引物如序列表SEQ  ID No.22‑24所示或第九组引物如序列表SEQ  ID No.25‑27 所示， 用于检测RHD基因和/或RH CE基因中的第五外 显子信息； 第十组引物如序列表SEQ  ID No.28‑30所示， 用于检测RHD基因和RHCE基因中 的第六外 显子信息； 第十一组引物如序列表SEQ  ID No.31‑33所示或第十二组引物如序列表SEQ  ID  No.34‑36所示， 用于检测RHD基因和/或RH CE基因中的第七外 显子信息； 第十三组引物如序列表SEQ  ID No.37‑39所示， 用于检测RHD基因和/或RHCE基因中的 第八外显子信息； 第十四组引物如序列表SEQ  ID No.40‑42所示， 用于检测RHD基因和/或RHCE基因中的 第九外显子信息； 第十五组引物如序列表SEQ  ID No.43‑45所示， 用于检测RHD基因和/或RHCE基因中的 第十外显子信息； 第十六组引物如序列表SEQ  ID No .46‑48所示， 用于检测RHD基因中的270 (rs12486 38537)位点遗传信息； 第十七组引物如序列表SEQ  ID No .49‑51所示， 用于检测RHD基因中的711 (rs765311512)位点遗传信息； 第十八组引物如序列表SEQ  ID No .52‑54所示， 用于检测RHD基因中的845 (rs1424840 09)位点遗传信息； 第十九组引物如序列表SEQ  ID No .55‑57所示， 用于检测RHD基因中的1227 (rs549616139)位 点遗传信息； 第二十组引物如序列表SEQ  ID No.58‑60所示， 用于检测RHCE基因中 的第二内含子109 片段插入的遗传信息； 第二十一组引物如序列表SEQ  ID No.61‑63所示， 用于检测RHCE基因中的第二外显子权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 114507724 A 2203位点遗传信息； 第二十二组引物如序列表SEQ  ID No.64‑66所示， 用于检测RHCE基因中的第二外显子 307位点遗传信息； 第二十三组引物如序列表SEQ  ID No.67‑69所示， 用于检测RHCE基因中的第五外显子 676位点遗传信息； 第二十四组引物如序列表SEQ  ID No.70‑72所示， 用于检测RHCE基因中的第一外显子 48位点遗传信息 。 3.根据权利要求2所述的一种检测人类红细胞Rh血型基因分型的引物 组， 其特征在于， 每组所述引物组由两条基于基因序列差异而设计的引物和一条共用配对引物组成。 4.根据权利要求3所述的一种检测人类红细胞Rh血 型基因分型的引物组， 其特 征在于， 第一组引物中检测upstream  Rhesus box 5’端基因信息的引物对为序列表SEQ  ID  No.1和SEQ  ID No.3， 检测downstream  Rhesus box 5’端基因信息的引物对为序列表SEQ   ID No.2和SEQ ID No.3； 第二组引物中检测upstream  Rhesus box3’端基因信息的引物对为序列表SEQ  ID  No.4和SEQ  ID No.6， 检测down stream Rhesus box3’端基因信息的引物对 为序列表SEQ  ID  No.5和SEQ ID No.6； 第三组引物中检测RHD基因中的第一外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.7和SEQ   ID No.9， 检测RH CE基因中第一外 显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.8和SEQ ID No.9； 第四组引物中检测RHD基因中的第三外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.10和 SEQ ID No.12， 检测RHCE基因中第三外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.11和SEQ  ID  No.12； 第五组引物中检测RHD基因中的第三外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.13和 SEQ ID No.15， 检测RHCE基因中第三外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.14和SEQ  ID  No.15； 第六组引物中检测RHD基因中的第四外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.16和 SEQ ID No.18， 检测RHCE基因中第四外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.17和SEQ  ID  No.18； 第七组引物中检测RHD基因中的第四外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.19和 SEQ ID No.21， 检测RHCE基因中第四外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.20和SEQ ID  No.21； 第八组引物中检测RHD基因中的第五外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.22和 SEQ ID No.24， 检测RHCE基因中第五外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.23和SEQ ID  No.24； 第九组引物中检测RHD基因中的第五外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.25和 SEQ ID No.27， 检测RHCE基因中第五外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.26和SEQ ID  No.27； 第十组引物中检测RHD基因中的第六外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.28和 SEQ ID No.30， 检测RHCE基因中第六外显子信息的引物对为序列表SEQ  ID No.29和SEQ  ID  No.30；权　利　要　求　书 2/4 页 3 CN 114507724 A 3