(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210317162.2 (22)申请日 2022.03.29 (71)申请人 广西壮族自治区兽医研究所 地址 530001 广西壮 族自治区南宁市友爱 北路51号广西兽医研究所 (72)发明人 谢芝勋　谢志勤　张艳芳　范晴　 谢丽基　万丽军　罗思思　李孟　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 关畅 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/35(2006.01) (54)发明名称 检测鸡滑液囊支 原体的方法及其所用试剂 (57)摘要 本发明公开了检测鸡滑液囊支原体的方法 及其所用试剂， 属于核酸 或微生物的测定或检验 方法技术领域。 本发明公开了检测或辅助检测鸡 滑液囊支原 体的方法， 所述方法包括利用试剂或 试剂盒对待测样品进行数字PCR， 根据数字PCR产 物确定待测样品是否为鸡滑液囊支原 体或， 是否 含有鸡滑液囊支原体或， 是否感染鸡滑液囊支原 体， 所述试剂或试剂盒包括鸡滑液囊支原体引物 探针， 所述鸡滑液囊支原体引物探针由特异扩增 含有核苷酸序列是SEQ  ID No.1的DNA片段在内 的鸡滑液囊支原 体基因组DNA片段的引物和与核 苷酸序列是SEQ  ID No.1的DNA片段特异结合的 探针组成。 该方法可用于 检测环境样品和食品。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图3页 CN 114703302 A 2022.07.05 CN 114703302 A 1.检测或辅助检测鸡滑液囊支原体的方法， 其特征在于： 所述方法包括利用试剂或试 剂盒对待测样品进 行数字PCR， 根据数字P CR产物确定或辅助确定待测样品是否为鸡 滑液囊 支原体或， 是否含有鸡滑液囊支 原体或， 是否感染鸡滑液囊支 原体， 所述试剂 或试剂盒为检测或辅助检测鸡滑液囊支原体的试剂 或试剂盒， 所述试剂 或试 剂盒包括鸡滑液囊支原体引物探针， 所述鸡滑液囊支原体引物探针包括引物MS ‑F和引物 MS‑R、 探针MS ‑Probe， 所述引物MS ‑F为核苷酸序列是SEQ  ID No.2的单链DNA； 所述引物MS ‑R为核苷酸序列是SEQ  ID No.3的单链DNA； 所述探针MS ‑Probe的核苷酸序列是SEQ  ID No.4。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于： 所述MS ‑F、 MS‑R、 MS‑Probe的物质的量比值 为2:2:1。 3.根据权利要求1或2所述的方法， 其特征在于： 所述数字PCR试剂或试剂盒还包括阳性 标准品质粒。 4.根据权利要求3所述的的方法， 其特征在于： 所述阳性标准品质粒包括核苷酸序列如 SEQ ID No.1所示的DNA分子 。 5.根据权利 要求1‑4中任一项所述的方法， 其特征在于： 所述数字PCR中采用的PCR体系 中所述MS ‑F的含量为1μmol/ μL， 所述MS ‑R的含量为1μmol/ μL， 所述MS ‑Probe的含量为0.5 μ mol/ μL。 6.根据权利要求1 ‑5中任一项所述的方法， 其特征在于： 所述数字PCR中采用的引物退 火条件为54℃1分钟。 7.权利要求1 ‑6中任一项所述的试剂或试剂盒。 8.权利要求7 所述的试剂或试剂盒在检测或辅助检测鸡滑液囊支 原体中的应用。 9.权利要求7所述的试剂或试剂 盒在检测或辅助检测待测样本是否感染鸡滑液囊支原 体的应用。 10.权利要求7所述的试剂或试剂盒在检测或辅助检测待测病原是否为鸡滑液囊支原 体的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114703302 A 2检测鸡滑液囊支原体的方 法及其所用试剂 技术领域 [0001]本发明属于核酸或微生物的测定或检验方法技术领域， 具体涉及检测 鸡滑液囊支 原体的方法及其所用试剂。 背景技术 [0002]鸡滑液囊支原体(Mycoplasma  synoviae,MS)， 通常寄生在呼吸道系统， 是一种能 感染鸽子、 鹌鹑等野禽和鸡、 鸭、 鹅等家禽， 从而引起以关节滑液囊膜及腱鞘等发生传染性 渗出性滑膜炎、 腱鞘滑膜炎及黏液囊炎为主要特征的传染病， 也可以引起呼吸道疾病， 严重 的甚至引起全身性传染病， 在 野生条件下家 禽支原体引起的关节炎都是由滑液支原体感染 引起的， 滑液支原体可继发新城疫病毒、 大肠杆菌、 传染性支气管炎病毒等病原 微生物混合 感染。 6日龄左右的雏鸡就可以感染传染性滑膜炎， 鸡群中常见滑膜炎感染率从2％到75％， 主要感染腿关节， 特别是胫跗跖跗关节， 引起鸡的淘汰率高， 给国内外的养鸡业造成巨大的 经济损失。 [0003]近年来， 随着技术的不断进步和发展， 微滴式数字PCR(droplet  digital PCR， ddPCR)是近几年出现的新一代聚合酶链式反应(polymerase  chain reaction， PCR)技术。 通过油包水技术将反应液分割为数万个纳米级大小的微滴， 每一个微滴都是一个独立的 PCR反应体系， 当PCR扩增完成后， 利用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测， 再根据统计学 中的泊松分布原理分析阳性微滴的个数与比例， 即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度， 从 而实现对低至单个拷贝核酸分子的绝对定量。 与传统实时荧光定量PCR(quantitative   real‑time PCR， qPCR)方法相比， 它不依赖于标准曲线， 因而定量结果更为精确， 同时也使 体系受反应抑制因子的影响大 大降低。 发明内容 [0004]本发明要解决的技 术问题是， 如何实现鸡滑液囊支 原体的精准检测。 [0005]为解决上述技术问题， 第一个方面， 本发明提供检测或辅助检测鸡滑液囊支原体 的方法， 所述方法包括利用试剂或试剂盒对待测样品进行数字PCR， 根据数字PCR产物确定 或辅助确定待测样品是否为鸡滑液囊支原体或， 是否含有鸡滑液囊支原体或， 是否感染鸡 滑液囊支 原体， [0006]所述试剂或试剂盒为检测或辅助检测鸡滑液囊支原体的试剂或试剂盒， 所述试剂 或试剂盒包括鸡 滑液囊支原体引物探针， 所述鸡 滑液囊支原体引物探针包括引物MS ‑F和引 物MS‑R、 探针MS ‑Probe， [0007]所述引物MS ‑F为核苷酸序列是SEQ  ID No.2的单链DNA； [0008]所述引物MS ‑R为核苷酸序列是SEQ  ID No.3的单链DNA； [0009]所述探针MS ‑Probe的核苷酸序列是SEQ  ID No.4。 [0010]进一步地， 上述的方法中， 所述MS ‑F、 MS‑R、 MS‑Probe的物质的量比值 为2:2:1。 [0011]进一步地， 上述的方法中， 所述数字PCR试剂或试剂盒还 包括阳性标准品质粒。说　明　书 1/8 页 3 CN 114703302 A 3