(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210334685.8 (22)申请日 2022.03.30 (71)申请人 宁波大学 地址 315211 浙江省宁波市江北区风 华路 818号 (72)发明人 蓝航镇　严淞　潘道东　吴振　 (74)专利代理 机构 宁波诚源专利事务所有限公 司 33102 专利代理师 王莹　袁翊朦 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) (54)发明名称 一种用于检测鸡源性成分的引物组、 检测试 剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明涉及一种用于检测鸡源性成分的引 物组， 包括一组外引物、 一组内引物和一对环引 物。 这些引物的特异性好、 灵敏度高， 能够较为准 确地检测样品中是否掺入了鸡源性成分， 并且检 测时间较短， 可以用于鸡源性 成分的现场快速检 测。 本发明还 涉及应用有上述引物组的检测试剂 盒及检测方法， 同样能够较为准确地检测样品中 是否掺入了鸡源性成分， 适用于鸡源性成分的现 场快速检测。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 附图7页 CN 114958833 A 2022.08.30 CN 114958833 A 1.一种用于检测鸡源性成分的引物组， 其特征在于： 包括一组外引物、 一组内引物和一 对环引物， 所述外引物、 内引物及环引物的核苷酸序列如下： 外引物F3： GC CCCATCCAACATCTCTG； 外引物B3： CGT TTGCGTGGAGATTCCG； 内引物FIP： ATG GCTAGTAGTAG GCCGGTGATTCGGCTCCCTATTAGCAGT； 内引物BIP： CACAGCAGACACATC CCTAGCCTCAGCCGTATTGTACGTTCC； 环引物LF： G GATTTGGGTCATGAG GCAG； 环引物LB： T TCTCCTCCGTAGCCCACA。 2.根据权利要求1所述的引物组， 其特征在于： 对所述环引物LB修饰RNA碱基CACA、 荧光 基团FAM和淬灭基团Dabcyl后得到可裂解分子信标C MB： FAM‑CCGCTTCTCCTCCGTAGCCrCrArCrAAGAAGCGG‑Dabcyl。 3.一种检测试剂 盒， 其特征在于： 应用有如权利要求1所述的用于检测鸡源性成分的引 物组。 4.根据权利要求3所述的检测试剂盒， 其特征在于： 所述检测试剂 盒的反应体系共计25 μL， 包括 10×反应缓冲液2.5 μL、 100mM的MgSO4 1μL、 25mM的dNTPs  1.2 μL、 5M的甜菜碱3 μL、 15 μM 的引物F3  1μL、 15 μM的外引物B3  1μL、 15 μM的内引物FIP  2 μL、 15 μM的内引物BIP  2 μL、 10 μM 的环引物LF  1μL、 10μM的环引物LB  1μL、 25×的SYBR GreenⅠ1μL、 8UμL‑1的Bst 2.0  WarmStar t DNA Polymerase 1 μL、 100ng μL‑1模板DNA1 μL， 其 余为无菌无酶水。 5.一种检测试剂 盒， 其特征在于： 应用有如权利要求2所述的用于检测鸡源性成分的引 物组。 6.根据权利要求5所述的检测试剂盒， 其特征在于： 所述检测试剂 盒的反应体系共计25 μL， 包括10 ×反应缓冲液2.5 μL、 100mM的MgSO4 1μL、 25mM的dNTPs  1.2 μL、 5M的甜菜碱3 μL、 15 μM的外引物F3  1μL、 15 μM的外引物B3  1μL、 15 μM的内引物FIP  2 μL、 15 μM的内引物BIP  2 μ L、 10 μM的环引物L F 1 μL、 15 μM的可裂解分子信标探针CMB  1 μL、 8U μL‑1的Bst 2.0 WarmStart   DNA Polymerase  1μL、 50U mL‑1的RNase H2 1μL、 100ngμL‑1模板DNA1μL， 其余为无菌无酶 水。 7.一种检测方法， 其特征在于： 通过如权利要求1～6中任一项所述的用于检测鸡源性 成分的引物组对待检测样品进行扩增反应， 根据有无S型扩增曲线判断检测样品中是否含 有鸡源性成分。 8.根据权利要求7所述的检测方法， 其特征在于： 所述扩增反应的扩增条件为64℃恒温 30min， 80℃保温10mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958833 A 2一种用于 检测鸡源性成分的引物组、 检测试剂盒及检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 一种鸡源性成分检测技术领域， 尤其涉及一种用于检测鸡源性成分的 引物组、 检测试剂盒及检测方法。 背景技术 [0002]现代生活节奏快， 我国是肉类生产和消费大国， 根据国家统计局数据， 2020年我国 全年猪牛羊禽肉产量 为7639万吨， 肉类总产量占世界总产量 三分之一左右。 [0003]畜禽肉掺假是指用劣质或低成本肉类替代高价肉类产品， 目的是获得更高的非法 利润或不 公平的商业竞争优势， 例如， 将鸡源性 成分掺入羊肉、 牛肉、 猪肉、 鸭肉、 马肉中等。 近年来， 随着越来越多的加工肉制品进入人们的饮食， 肉类掺假事件日益严重。 这不仅侵犯 了消费者的合法权益， 而且还冲击了宗教信仰， 造成严重的社会问题。 为食品质量把关， 打 击肉类掺假的违法行为已经刻不容 缓。 因此开 发出一种快速、 简便、 适用于畜禽肉真实性现 场检测的鉴别技 术具有重要的研究价 值和应用前 景。 [0004]目前， 畜禽肉制品真实性检测技术主要包括光谱技术、 质谱技术、 色谱技术以及基 于核酸的分子生物学技术和基于蛋白质的免疫分析技术。 与蛋白质相比， DNA 不易受到食品 加工方式的影响， 稳定性更高； DNA存在于大部 分的组织细胞中， 即使动物组织部位不同， 也 可得到可靠的鉴定信息， 因此基于核酸的分子生物学技术已经成为动物源性成分鉴定的主 流技术。 聚合酶链式反应(Polymerase  chain reaction， PCR)是检测食 品或肉类样品中核 酸的主要方法， 基于PCR的检测方法已经非常成熟， 已被应用于肉制品中的病原体检测、 物 种鉴定和寄生虫检测 。 但是PCR变性、 退火和延伸时的温度不同， 并且整个PCR过程耗时长， 反应时间一般在90 ‑180min， 无法满足畜禽肉真实性现场快速检测的需要。 [0005]近年来， 核酸等温扩增技术的发展为食品真实性现场快速检测提供了新的选择和 途径。 核酸等温扩增技术的特点是在恒定的温度条件下进行扩增和结果判读 。 其中， 环介导 等温扩增技术(Loop ‑mediated  isothermal  amplification， LAMP)是目前研究最多、 最成 熟的一种等 温扩增技术， LAMP的反应原理是针对靶基因的6个特定区域设计4 ‑6种特异性引 物利用一种链置换DNA聚合酶(Bst  DNA polymerse)在恒温条件(60 ‑65℃左右)下孵育几十 分钟， 即可实现核酸的扩增， 适用于现场快速检测。 [0006]引物是检测时需要用到的材料之一。 经查， 针对用于检测 鸡源性成分的引物组、 检 测试剂盒及检测方法， 研究较少。 发明内容 [0007]本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种用于检测 鸡源性成分的引物组， 以 便较为准确地检测样品中是否掺入了鸡源性成分。 [0008]本发明所要解决的第二个技 术问题是提供一种应用有上述引物组的检测试剂盒。 [0009]本发明所要解决的第三个技 术问题是提供一种应用有上述引物组的检测方法 [0010]本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为： 一种用于检测 鸡源性成分说　明　书 1/8 页 3 CN 114958833 A 3