(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210329027.X (22)申请日 2022.03.30 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114622020 A (43)申请公布日 2022.06.14 (73)专利权人 华南农业大 学 地址 510610 广东省广州市天河区五山 华 南农业大 学 (72)发明人 聂庆华　王芷筠　蔡丹凤　周震　 徐海平　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 陈光磊 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) (56)对比文件 CN 113453702 A,2021.09.28WO 2021142458 A1,2021.07.15 CN 113215271 A,2021.08.0 6 CN 104080454 A,2014.10.01 CN 110997901 A,2020.04.10 JP 2020089313 A,2020.0 6.11 WO 2019210268 A 2,2019.10.31 CN 101948 831 A,201 1.01.19 CN 101948 832 A,201 1.01.19 CN 112226515 A,2021.01.15 CN 112501318 A,2021.0 3.16 CN 10181245 0 A,2010.08.25 Marco Zampig a等.Application of omics technologies for a de eper insight i nto quali-quantitative producti on traits i n broiler chickens:A review. 《Journal of Animal Science and Bi otechnology》 .2018, (第04期), 韦凤英等.广西三黄鸡选 育及产业 化. 《养禽 与禽病防治》 .2019,(第0 5期), 审查员 陈小燕 (54)发明名称 一种与鸡生长性状相关的KLHL31基因分子 标记及应用 (57)摘要 本发明公开了一种与鸡生长性状相关的 KLHL31基因分子标记及应用， 涉及生物技术领 域。 所述分子标记的核苷酸序列如SEQIDNO:1所 示， 所述分子标记存在两个SNP位点， SNP1为NC_ 052534.1:g.878 28628G>C， SNP2为NC_05253 4.1: g.87828969C>T。 本发明通过分析KLHL31基因， 发 现该基因扩增片段区域有多个与鸡生长性状显 著相关的SNP位点， 并且 通过试验验证， SNP1位点 与91日龄体重存在显著相关(p<0.05)； SNP2位点 与77日龄体重和84日龄体重均存在显著相关(p< 0.05)。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图1页 CN 114622020 B 2022.09.27 CN 114622020 B 1.检测与鸡体重相关的SNP分子标记的引物对在鸡遗传育种中的应用， 其特征在于， 所 述SNP分子 标记存在SNP1和SNP2 两个SNP位点， 所述SNP1为NC_052 534.1:g.87828628G>C， 所 述SNP2为NC_052534.1:g.87828969C>T， 所述SNP1的基因型包括GG、 GC和CC； 所述SNP2的基 因型包括CC、 CT和TT； 当SNP1位点的基因型为GG时， 则91日龄鸡的体重大； 当SNP2位点的基 因型为CC时， 则77日龄体重和84日龄鸡的体重大， 所述鸡为雌性宁都三黄鸡。 2.如权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 所述引物对的序列如SEQ  ID NO:2‑3所示。 3.一种利用检测与鸡体重相关的SNP分子标记的引物对鉴别鸡生长性状的方法， 其特 征在于， 所述SNP分子标记存在SNP1和SNP2两个SNP位点， 所述SNP1为NC_052534.1: g.87828628G>C， 所述SNP2为NC_052 534.1:g.87828969C >T， 所述SNP1的基因型包 括GG、 GC和 CC； 所述SNP2的基因型包括C C、 CT和TT； 所述方法包括以下步骤： (1)提取待测鸡基因 组DNA， 利用引物对进行PCR扩增， 获得扩增产物； (2)对所述扩增产物测序， 检测SNP1位点的基因型， 当SNP1位点的基因型为GG时， 则91 日龄鸡的体重大； 检测SNP2位点的基因型， 当SNP2位点的基因型为CC时， 则77日龄体重和84 日龄鸡的体重大； 所述鸡为雌性宁都三黄鸡， 所述引物对的序列如SEQ  ID NO:2‑3所示。 4.根据权利 要求3所述的方法， 其特征在于， 在步骤(1)中， 所述PCR扩增的体系为： 模板 DNA 2 μL、 2×Rapid Taq Master Mix 25 μL、 上游引物 2 μL、 下游引物 2 μL、 ddH2O 19 μL。 5.根据权利 要求4所述的方法， 其特征在于， 在步骤(1)中， 所述PCR扩增的反应程序为： 95℃预变性3min； 95℃变性15s， 58℃退火15s， 72℃延伸15s， 35个循环； 72℃彻底延伸3min； 4℃保存。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114622020 B 2一种与鸡生长性状相关的KLHL31基因分子标记及应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 特别是涉及一种与鸡生长性状相关的KLHL3 1基因分子 标记及应用。 背景技术 [0002]单核苷酸多态性(Single  Nucleoti de Polymorphism,SNP)是指在基因组水平上 由单个核苷酸插入、 缺 失、 颠换和转换等变异而引起的DNA序列的多态 性。 SNP是动物可遗传 变异中最常见的一种， 在动物基因组中广泛存在， 具有稳定遗传， 易于检测等特性。 在动物 生产实践中， SNP可用于分子标记辅助选择(Molecular  Mark‑assist Selection,MAS)， 提 高选种准确 性和选育效果。 找到与性成熟相关的有效的分子标记， 可以为鸡的性生长性状 的分子标记辅助选择育种提供有利的技 术支撑。 [0003]KLHL31(Kelch  like family member 31)是脊椎动物中Kelch样家族的成员， 其编 码的蛋白质含有保守的BTB结构域和串连重复的K elch结构域。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种与鸡生长性状相关的KLHL3 1基因分子标记及 应用， 以解 决上述现有技术存在的问题， 本发 明发现KLHL31基因扩增片段的SNP位点， 并将其与鸡生长 性状关联分析， 为分子标记辅助选择提供新的SNP分子标记。 [0005]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0006]本发明提供一种与鸡生长性状相关的KLHL3 1基因分子标记， 所述分子标记的核苷 酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述分子标记存在两个SNP位点， SNP1为NC_052534.1: g.87828628  G>C， SNP2为 NC_052534.1:g.87828969  C>T。 [0007]进一步地， 所述SNP1的基因型包括G G、 GC和CC； 所述SNP2的基因型包括C C、 CT和TT。 [0008]本发明还提供一种鉴别鸡生长性状的引物对， 所述引物对的序列如SEQ  ID NO:2‑ 3所示。 [0009]本发明还提供一种利用上述的分子标记鉴别鸡生长性状的方法， 包括以下步骤： [0010](1)提取待测鸡基因 组DNA， 利用上述的引物对进行PCR扩增， 获得扩增产物； [0011](2)对所述扩增产物测序， 检测SNP1位点的基因型， 当SNP1位点的基因型为GG时， 则91日龄体重大； 检测SNP2位点的基因型， 当SNP2位点的基因型为CC时， 则77日龄体重和84 日龄体重大。 [0012]进一步地， 在步骤(1)中， 所述PCR扩增的引物对序列为SEQ  ID NO:2‑3所示序列。 [0013]进一步地， 在步骤(1)中， 扩增体系为： 模板DNA  2μL、 2×Rapid Taq Master Mix  25 μL、 上游引物 2 μL、 下游引物 2 μL、 ddH2O 19 μL。 [0014]进一步地， 在步骤(1)中， 扩增反应程序为： 95℃预变性3min； 95℃变性15s， 58℃退 火15s， 72℃延伸15s， 3 5个循环； 72℃彻底延伸3mi n； 4℃保存。 [0015]本发明还提供一种鉴别鸡生长性状的试剂盒， 包 含上述的引物对。说　明　书 1/5 页 3 CN 114622020 B 3