(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210333150.9 (22)申请日 2022.03.31 (71)申请人 北京农学院 地址 102206 北京市昌平区回龙观镇北农 路7号 (72)发明人 侯晓林　周建民　王蕾　刘凤华　 李焕荣　周双海　 (74)专利代理 机构 北京众合诚成知识产权代理 有限公司 1 1246 专利代理师 刘妮 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/15(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测牛棒状杆菌的引物组合物及 应用 (57)摘要 本发明公开一种用于检测牛棒状杆菌的引 物组合物及应用， 应用的试剂盒内包含外引物、 内引物和环引物， 所述外引物包括引物F3和引物 B3， 所述内引物包括引物FIP和引物BIP， 所述环 引物包括引物LF和引物LB， 应用时引物F3、 引物 B3、 引物FIP、 引物BIP、 引物LF和引物LB的摩尔浓 度比为1:1:4:4:2:2； 本发明试剂盒内的引 物组 合物可用于检测样本中是否含有牛棒状杆菌基 因， 灵敏度好、 特异性高， 可准确定量的测量出牛 棒状杆菌的基因， 检测时间短， 为牛棒状杆菌的 监测提供技 术支持。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图1页 CN 114672578 A 2022.06.28 CN 114672578 A 1.一种用于牛棒状杆菌检测的试剂盒在环介导等温扩增方法中检测牛棒状杆菌基因 的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述试剂盒内包括引物组合物， 所述引物 组合物包括外引物、 内引物和环引物， 所述外引物包括引物F3和引物B3， 所述内引物包括引 物FIP和引物BIP， 所述环引物包括引物LF和引物LB。 3.根据权利要求2所述的一种用于牛棒状杆菌检测的试剂 盒， 其特征在于： 在所述环介 导等温扩增方法中检测牛棒状杆菌基因的应用， 试剂盒 中引物组合物引物F3、 引物B3、 引物 FIP、 引物BIP、 引物LF和引物LB的摩尔浓度比为1:1:4:4:2:2。 4.根据权利要求2所述的一种用于牛棒状杆菌检测的试剂 盒， 其特征在于： 所述引物F3 的序列如SEQ  ID NO： 1所示， 所述引物B3的序列如SEQ  ID NO： 2所示， 所述引物FIP的序列如 SEQ ID NO： 3所示， 所述引物BIP的序列如SEQ  ID NO： 4所示， 所述引物LF的序列如SEQ  ID  NO： 5所示， 所述引物LB的序列如SEQ  ID NO： 6所示。 5.根据权利要求1所述的一种用于牛棒状杆菌检测的试剂盒在环介导等温扩增方法中 检测牛棒状杆菌基因的应用， 检测步骤具体为： 步骤一、 提取待测菌质粒DNA； 步骤二、 以步骤一中提取的基因为模板， 采用试剂盒内的引物 组合物进行对16S基因 的 环介导等温扩增。 6.根据权利要求5所述的一种用于牛棒状杆菌检测的试剂 盒， 其特征在于： 在所述环介 导等温扩增方法中检测牛棒状杆菌基因的应用， 环介导等温扩增反应条件为60 ‑65℃恒温 保持60min。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114672578 A 2一种用于 检测牛棒 状杆菌的引物组合物及应用 技术领域 [0001]本发明涉及细菌检测技术领域， 尤其涉及 一种用于检测牛棒状杆菌的引物组合物 及应用。 背景技术 [0002]一些患病动物组织和分泌物、 动物性产品、 环境中采集的样本内含有牛棒状杆菌 感染或污染； [0003]牛棒状杆菌是一种革兰氏阳性小杆菌， 条件性致病， 世界范围内广 泛分布， 可感染 多种动物， 全球众多实验动物机构列为实验大、 小鼠尤其是免疫缺陷鼠的重点监测病原体 之一， 也引起其他疾病， 目前对于牛棒状杆菌监测技术较为缺乏， 导致无法快速准确地检测 出牛棒状杆菌， 因此， 本发明提出一种用于检测牛棒状杆菌的引物组合物以解决现有技术 中存在的问题。 发明内容 [0004]针对上述问题， 本发明的目的在于提出一种用于检测牛棒状杆菌的引物组合物及 应用， 该用于检测牛棒状杆菌的引物组合物应用的试剂盒内的引物组合物可用于检测样本 中是否含有牛棒状杆菌基因， 灵敏度好、 特异性高， 可准确定量的测量出牛棒状杆菌的基 因， 检测时间短， 为牛棒状杆菌的监测提供技 术支持。 [0005]为实现本发明的目的， 本发明通过以下技术方案实现： 一种用于牛棒状杆菌检测 的试剂盒在环介导 等温扩增方法中检测牛棒状杆菌基因的应用。 [0006]进一步改进在于： 所述试剂盒内包括引物组合物， 所述引物组合物包括外引物、 内 引物和环引物， 所述外引物包括引物F3和引物B3， 所述内引物包括引物FIP和引物BIP， 所述 环引物包括引物LF和引物LB。 [0007]进一步改进在于： 在所述环介导等温扩增方法中检测牛棒状杆菌基因的应用， 试 剂盒中引物组合物引物F3、 引物B3、 引物FIP、 引物BIP、 引物LF和引物LB的摩尔浓度比为1: 1:4:4:2:2。 [0008]进一步改进在于： 所述引物F3的序列如SEQ  ID NO： 1所示， 所述引物B3的序列如 SEQ ID NO： 2所示， 所述引物FIP的序列如SEQ  ID NO： 3所示， 所述引物BIP的序列如SEQ  ID  NO： 4所示， 所述引物LF的序列如SEQ  ID NO： 5所示， 所述引物LB的序列如SEQ  ID NO： 6所示。 [0009]一种用于牛棒状杆菌检测的试剂盒在环介导等温扩增方法中检测牛棒状杆菌基 因的应用， 检测步骤具体为： [0010]步骤一、 提取待测菌质粒DNA； [0011]步骤二、 以步骤一中提取的基因为模板， 采用试剂盒内的引物组合物进行对16S基 因的环介导 等温扩增。 [0012]进一步改进在于： 在所述环介导等温扩增方法中检测牛棒状杆菌基因的应用， 环 介导等温扩增反应条件为6 0‑65℃恒温保持6 0min。说　明　书 1/4 页 3 CN 114672578 A 3