(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210338237.5 (22)申请日 2022.04.01 (71)申请人 山东鲁抗好丽友生物技 术开发有限 公司 地址 272000 山东省济宁市任城区高新区 东外环路6号 (72)发明人 金日虎　古恒森　张红燕　马凤杰　 包文智　白龙云　 (74)专利代理 机构 济南泉城专利商标事务所 37218 专利代理师 张春连 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测结直肠癌 的双探针组合物及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测结直肠癌 的双 探针组合物及其应用， 包括靶标基因SDC2和内参 基因ACTB， 靶标基因SDC2 包括S‑F、 S‑R、 S‑P1和S‑ P2， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO.1~4所示； 内参基 因ACTB包 括A‑F、 A‑R和A‑P1， 其核苷酸序列如SEQ   ID NO.5~7所示。 本发明中的用于检测结直肠癌 的双探针组合物可应用在制备检测结直肠癌试 剂盒中。 本发明通过采用双探针荧光PCR技术， 能 够明显提高检测试剂的灵敏度， 具备灵敏度高、 特异性强的优势。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 114672565 A 2022.06.28 CN 114672565 A 1.一种用于检测结直肠癌的双探针组合物， 其特征在于， 包括靶标基因SDC2和内参基 因ACTB； 所述的靶标基因SDC2包括S ‑F、 S‑R、 S‑P1和S‑P2， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO . 1~4所 示； 所述的内参基因ACTB包括A ‑F、 A‑R和A‑P1， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO . 5~7所示。 2.根据权利要求1所述的用于检测结直肠癌的探针组合物， 其特征在于， 所述的靶标基 因SDC2使用FAM荧 光基团修饰， 所述的内参基因ACTB使用Cy5荧 光基团修饰。 3.一种权利要求1或2所述的探针组合物在制备检测结直肠癌试剂盒中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述的检测结直肠癌试剂盒中S ‑F、 S‑R、 A‑ F、 A‑R在PCR反应预混液中的浓度为0.2 μM， S ‑P1、 S‑P2和A‑P1的浓度为0.0 5 μM。 5.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述的检测结直肠癌试剂盒还包括Taq酶 和去离子水。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114672565 A 2一种用于 检测结直肠癌的双探针组合物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术及医学领域， 具体涉及一种用于检测结直肠癌的双探针 组合 物及其应用。 背景技术 [0002]根据2020年国家癌 症中心发布的中国癌 症新发病例数前十的癌 症分别是： 肺癌82 万， 结直肠癌56万， 胃癌48万， 乳腺癌42万， 肝癌41万， 食管癌32万， 甲状 腺癌22万， 胰腺癌12 万， 前列腺癌12万， 宫颈癌1 1万， 这十种癌症占新发癌症数的78%。 [0003]结直肠癌是我国发病率第二位 的癌肿， 2020年新发人数约56万， 死亡人数约25万 人， 严重威胁着居民健康。 中华医学会检验医学分会分子诊断学组在中华检验医学杂志刊 发的 《早期结直肠癌和癌前病变实验诊断技术中 国专家共识》 中指出， 人类SD C2基因甲基化 检测技术获得了专 家认可和推荐， 同时共识粪便DNA检测是推荐的筛查方法。 [0004]硫酸类肝素蛋白多糖2基因 （SDC2） ， 位于人类8号染色体的长臂上， 编 码Syndecan ‑ 2蛋白。 研究发现Syndecan ‑2蛋白可介导结直肠癌细胞的粘附等功能， 与结直肠癌细胞增殖 密切相关。 研究证实， 相对于正常结直肠组织， SD C2基因在不同分期的结直肠癌和部 分肠进 展期腺瘤组织中呈现高水平的甲基化现象， 提示其具有结直肠癌和肠进展性腺瘤检测的临 床价值。 SDC2基因甲基化是结直肠癌癌前病变的重要标志物之一。 研究人员发现结直肠肿 瘤标本SDC2基因调控区甲基化水平显著高于配对的相邻非肿瘤组织， 阳性率可达92.9%~ 100%， 且在肿瘤发生的早期阶段甚至腺瘤阶段就可 稳定检出。 [0005]目前市场上已出现有SDC2基因甲基化的相关检测试剂出现， 主要是采用常见的荧 光PCR方法学进行检测 。 但受限于现有荧光PCR技术的瓶颈和靶点选择， 检测结果存在着特 异性低、 灵敏度不足等问题， 造成一些临床假阴性或假阳性结果。 [0006]因此， 研发一种特异性和灵敏度高的结肠癌检测方法具有重要意 义。 发明内容 [0007]针对现有技术中荧光PC R检测结直肠癌特异性低、 灵敏度不足的问题， 本发明提供 了一种用于检测结直肠癌的双探针组合物及其应用， 采用双探针荧光P CR技术， 能够明显的 提高检测试剂的灵敏度， 具有灵敏度高、 特异性强的优势。 [0008]本发明通过以下技 术方案实现： 一种用于检测结直肠癌的双探针组合物， 包括靶标基因SDC2和内参基因ACTB； 所 述的靶标基因SDC2包括S ‑F、 S‑R、 S‑P1和S‑P2， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO . 1~4所示； 所述 的内参基因ACTB包括A ‑F、 A‑R和A‑P1， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO . 5~7所示。 [0009]进一步地， 所述的靶标基因SDC2使用FAM荧光基团修饰， 所述的内参基因ACTB使用 Cy5荧光基团修饰。 [0010]本发明中， 所述的探针组合物在制备检测结直肠癌试剂盒中的应用。 [0011]进一步地， 所述的检测结直肠癌试剂盒中S ‑F、 S‑R、 A‑F、 A‑R在PCR反应预混液中的说　明　书 1/6 页 3 CN 114672565 A 3