(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210347339.3 (22)申请日 2022.04.01 (71)申请人 孙家和 地址 215009 江苏省苏州市高新区科华路 28号 申请人 杨应鑫　朱烨颖　朱奕玮　陆祺　 桑倩倩　梁睿　单双双 (72)发明人 孙家和　杨应鑫　朱烨颖　朱奕玮　 陆祺　桑倩倩　梁睿　单双双　 (74)专利代理 机构 南京业腾知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 32321 专利代理师 徐莉娟 (51)Int.Cl. C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测BCR-ABL融合基因的ERA引物和探 针及试剂盒 (57)摘要 本发明涉及一种检测BCR ‑ABL融合基因的 ERA引物和探针， 包 括检测BCR ‑ABL1基因的ERA引 物和探针及检测BCR ‑ABL2基因的ERA引物和探 针， ERA引物和探针的核苷酸序列如SEQIDN O:1‑4 所示。 检测BCR ‑ABL融合基因的方法： 以待测样本 DNA为模板， 采用上述检测BCR ‑ABL1基因的ERA引 物和探针及检测BCR ‑ABL2基因的ERA引物和探针 进行酶促重组等温扩增， 然后对扩增产物进行检 测， 根据检测结果进行判断。 与现有检测BCR ‑ ABL1基因的方法相比， 本发明检测方法能够快 速、 灵敏、 特异的检测出两种类型的BCR ‑ABL融合 基因， 并且操作简单， 不需要复杂仪器， 检测成本 低。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图2页 CN 114774525 A 2022.07.22 CN 114774525 A 1.一种检测BCR ‑ABL融合基因的ERA引物和探针， 其特征在于， 包括检测BCR ‑ABL1基因 的ERA引物和探针以及检测BCR ‑ABL2基因的ERA引物和探针； 所述检测BCR ‑ABL1基因的ERA引物和探针包括BCR ‑ABL1‑F1引物、 BCR ‑ABL12‑R反向引 物和BCR‑ABL12‑PB探针， 所述BCR ‑ABL1‑F1引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述 BCR‑ABL12‑R反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示， 所述BCR ‑ABL12‑PB探针引物的核 苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示； 所述检测BCR ‑ABL2基因的ERA引物和探针包括BCR ‑ABL2‑F78引物、 BCR ‑ABL12‑R反向引 物和BCR‑ABL12‑PB探针， 所述BCR ‑ABL2‑F78引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示， 所述 BCR‑ABL12‑R反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示， 所述BCR ‑ABL12‑PB探针引物的核 苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示。 2.一种检测BCR ‑ABL融合基因的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求1所述检测BCR ‑ ABL1基因的ERA引物和探针以及检测BCR ‑ABL2基因的ERA引物和探针。 3.如权利要求2所述检测BCR ‑ABL融合基因的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括 溶解剂和激活剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774525 A 2一种检测BCR ‑ABL融合基因的 ERA引物和探针及 试剂盒 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种检测B CR‑ABL融合基因的ERA引物和探针 及试剂盒。 背景技术 [0002]慢性髓系白血病(chronic  myeloid leukemia， CML)是骨髓造血干细胞克隆性增 殖形成的恶性肿瘤， 占成人白血病的15％。 针对CML分子发病机制的小分子酪氨 酸激酶抑制 剂(TKI)将CML的治疗 带入了分子靶向治疗阶段， 显著延长了患者的生存时间。 CML 发病机制 主要为9号染色体和22号染色体易位形成Ph染色体， 产生BCR ‑ABL融合基因。 BCR ‑ABL融合基 因中BCR基因的断裂区主要分为三个类型： Major ‑BCR(M‑BCR)、 minor(m ‑BCR)和u‑BCR。 其 中， M‑BCR区BCR基因的断裂点通常被限制在一个5.8kb的DNA片段区域， 断裂点发生在外显 子e13和e14或e14和e15之间， 断裂后的BCR基因外显子上游留在22号染色体上， 并与ABL基 因断裂后的外显子a2融合， 转录为e13a2或e14a2型mRNA， 编码P210融合蛋白， 见于9 5％以上 的CML病例中； m ‑BCR区域的BCR基因断裂点通常发生在外显子e1和e2之间， 转录为e1 a2型的 mRNA， 编码P190融合蛋 白， 见于3％非典型CML和2/3的Ph+急性B淋巴细胞白血病病例中； u ‑ BCR区域的BCR基因断裂点通常发生在外显子e19和e20之间， 转录为e 19a2型mRNA， 编码P230 融合蛋白， 常见于慢性中性粒细胞白血病病例中。 CML表现为持续、 进行性外周血白细胞数 量增加， 且分类中出现不同分化阶段的粒细胞(主要以中性粒细胞增多为主)， 90％以上患 者白血病细胞中有恒定的、 特征性的Ph染色体及其分子标志BCR ‑ABL融合基因。 因此， BCR ‑ ABL融合基因检测已经成为C ML诊断的“黄金标准”。 [0003]目前检测BCR ‑ABL融合基因的方法主要有荧光原位杂交法、 荧光定量PCR法、 基因 芯片法、 P CR测序法等。 然而， 该类方法均存在设备依赖性、 成本高、 实验方法繁琐， 时间长等 缺点。 [0004]酶促重组等 温扩增(Enz ymatic Recombinase  Amplificat ion， ERA)方法自近年来 被开发出来后， 因其快速(15 ‑30分钟)、 简易(无需特殊设备)、 灵敏、 特异 等特点近年来被广 泛用于病毒、 细菌等物种的鉴定 工作， 为物种大规模快速检测做出了巨大贡献。 发明内容 [0005]本发明的目的是解决现有技术中检测BCR ‑ABL融合基因的方法存在的不足， 提供 一种检测BCR ‑ABL融合基因的ERA引物和探针及试剂盒。 [0006]技术方案 [0007]一种检测BCR ‑ABL融合基因的ERA引物和 探针， 包括检测BCR ‑ABL1基因的ERA引物 和探针以及检测BCR ‑ABL2基因的ERA引物和探针； [0008]所述检测BCR ‑ABL1基因的ERA引物和探针包括BCR ‑ABL1‑F1引物、 BCR ‑ABL12‑R反 向引物和BCR ‑ABL12‑PB探针， 所述BCR ‑ABL1‑F1引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所 述BCR‑ABL12‑R反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示， 所述BCR ‑ABL12‑PB探针引物的说　明　书 1/5 页 3 CN 114774525 A 3