(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210349816.X (22)申请日 2022.04.02 (71)申请人 西北农林科技大 学 地址 712100 陕西省咸阳市杨凌示范区西 农南路3号 申请人 西安黄氏生物工程有限公司 (72)发明人 张皓　马琦　胡想顺　黄卫利　 陈雨馨　 (74)专利代理 机构 西安汇恩知识产权代理事务 所(普通合伙) 6124 4 专利代理师 毕波 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定黑森瘿蚊的引物对及其 鉴定方法 (57)摘要 本发明提供了一种鉴定黑森瘿蚊的引物对， 引物对包 括上游引物HFSP ‑1和下游引物 HFSP‑2； 上游引物HFSP ‑1的核苷酸序列如SEQIDNO:1所 示， 上游引物HFSP ‑2的核苷酸序列如SEQIDNO:2 所示。 还提供了鉴定方法， 用上游引物HFSP ‑1和 下游引物 HFSP‑2对待测样本的DNA进行PCR扩增， 若出现170bp的DNA条带， 则待测样本为黑森瘿 蚊。 本发明为黑森瘿蚊的鉴定提供简便稳定的分 子标记， 解决黑森瘿蚊快速、 准确鉴定的技术难 题。 权利要求书1页 说明书3页 序列表10页 附图1页 CN 114807383 A 2022.07.29 CN 114807383 A 1.一种鉴定黑森瘿蚊的引物对， 其特征在于， 所述引物对包括上游引物HFSP ‑1和下游 引物HFSP‑2； 所述上游引物HFSP ‑1的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述上游引物H FSP‑2 的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 2.一种用权利要求1所述的鉴定黑森瘿蚊的引物对鉴定黑森瘿蚊的方法， 其特征在于， 该方法为： 用上游引物HFSP ‑1和下游引物HFSP ‑2对待测样本的DNA进行PCR扩增， 若出现170bp的 DNA条带， 则所述待测样本为 黑森瘿蚊 。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应体系为： 2 ×PCR  Master mix 10 μL、 10mM的上游引物HFSP ‑1 1μL、 10mM的下游引物HFSP ‑2 1μL、 所述待测样 本的DNA 1 μL， ddH20补足至20 μL。 4.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应程序为： 94℃预变性 5min； 94℃变性 45s， 55℃退火45s， 72℃延伸120s， 3 5个循环； 72℃延伸10mi n， 4℃下保存。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807383 A 2一种鉴定黑森瘿蚊的引物对及其鉴定方 法 技术领域 [0001]本发明属于黑森瘿蚊鉴定技术领域， 具体涉及一种鉴定黑森瘿蚊的引物对及 其鉴 定方法。 背景技术 [0002]黑森瘿蚊(Mayetiola  destructor(Say))属双翅目(Diptera)、 瘿蚊科   (Cecidomyiidae)、 瘿蚊亚科(Cecidomyiinae)、 喙瘿蚊属(Mayetiola)， 是世界性小麦重要 害虫， 也是我国进境 植物检疫 害虫。 [0003]黑森瘿蚊在各地一年可发生1 ‑6代不等， 具有兼性滞育习性。 以三龄幼虫在围蛹内 潜藏于冬小麦植株或小麦残留麦茬上越冬。 翌年春天， 越冬幼虫发育化蛹。 成虫不取食， 寿 命约3d。 卵多产于 寄主叶片正面脉沟中， 经3 ‑10d孵化。 初孵幼虫沿脉沟爬入叶鞘取食。 单头 幼虫取食即可造成小麦植株生长受阻， 甚至死亡而造成经济损失。 除小麦外， 还 可取食为害 大麦、 黑麦、 冰草属植物、 葡萄龙牙草以及其他多种禾本科牧草和杂草。 黑森瘿蚊在国内适 生区广泛， 我国65％的麦区均适于其定殖发生， 一旦在国内扩散 蔓延， 将对我国小麦安全生 产构成严重威胁。 因此， 加强进境检疫与国内疫情防控 对于预防其扩散蔓延意 义重大。 [0004]目前， 黑森瘿蚊的鉴定识别依赖成虫的形态鉴定， 成虫主要鉴别特征如下： 体形似 小蚊， 灰黑色。 体长3 ‑4mm， 雌虫大于雄虫。 头、 复眼和胸部背面黑色， 胸侧和腹部黄褐色或红 褐色。 下颚须4节， 第一节短， 第二节较粗， 第三节较长， 第四节长于第三节的1/3。 触角黄色 或黄褐色，  16‑18节， 雄虫多为17节， 雌虫多为16节。 触角基节铁钻形， 梗节球形， 鞭节圆锥 形， 有环丝， 具有直立短毛。 雄虫触角鞭节有近透明的细长柄。 胸部背面有2条明显的纵纹； 小盾片黑色， 具有黑毛。 翅较宽， 翅面密布短毛， 后缘毛较长。 翅脉简单， 前缘脉(C)淡褐色， 基部粉红色； 第一纵脉(R1)很短， 几乎与前缘脉合 并， 与翅前缘中部相接； 第二纵脉(Rs)  较 发达且直， 至近翅尖时稍向下弯， 在翅尖之前与后缘相接； Cu脉分叉处和 Cu2脉与后缘的相 接处， 以及R1脉的末端几乎在一条直线上。 平衡棒 发达， 淡红色， 覆 不均匀的黑色鳞片 。 足细 长， 跗节5节， 第 Ⅰ节最短， 第 Ⅱ节最长， 第 Ⅴ节近末端具一对爪， 弯曲细长， 两爪间有一爪间 突， 有爪垫一个， 长于爪， 雌、 雄爪均单一无齿。 腹部各节背板两侧各具有一大方形黑斑点。 雌虫产卵管由3节组成， 圆柱形， 淡粉红色， 末节端部为褐色。 雄虫腹部末节淡粉红色， 具一 对褐色抱握器， 生殖器位于其中， 上生殖板较宽， 上面有许多感觉孔， 缺刻深凹入， 多数呈 “V”形， 少数略呈 “U”形。 下生殖板较窄， 两侧端部一般可见4 ‑5个乳头状突起。 尾铗二节， 第 一节粗壮， 第二节细长， 长 近于宽的4倍， 末端生爪。 [0005]形态鉴定方法对标本的完整性和鉴定者的专业水平均要求较高， 且在进境传 播中 截获的主要 虫态为幼虫和蛹， 采用形态鉴定方法远远不能满足口岸检疫 快速、 准确的要求； 在国内疫情监测中， 采用性诱捕技术时， 会诱捕到非靶标种类， 且捕获的虫体往往破损， 不 利于形态识别。 因此， 无论是口岸检疫工作还是生产一线疫情监测， 均亟需一种快速、 准确、 可靠的黑森瘿蚊种类鉴定技 术。说　明　书 1/3 页 3 CN 114807383 A 3