(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210342888.1 (22)申请日 2022.04.02 (71)申请人 广东省农业科 学院动物卫 生研究所 地址 510640 广东省广州市天河区五山汇 景南路白石岗街21号 (72)发明人 吕殿红　赵亮　翟颀　温肖会　 罗胜军　贾春玲　周秀蓉　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 薛建强 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一组用于检测PEDV、 TGEV和PDCoV的引物探 针组、 试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了一组用于检测PEDV、 TGEV和 PDCoV的引物探针组、 试剂盒及其应用， 特别涉及 分子检测技术领域。 本发明的用于检测PEDV、 TGEV和PDCoV中的至少一种的引物探针组， 包括 第一引物探针组、 第二引物探针组和第三引物探 针组； 所述第一引物探针组包 括针对PEDV的特异 性引物对和探针； 所述第二引物探针组包括针对 TGEV的特异性引物对和探针； 所述第三引物探针 组包括针对PDCoV 的特异性引物对和探针。 该组 引物探针组灵敏性好， 特异性高， 重复性好， 能够 同时鉴别诊断PEDV、 TGEV和PDCoV， 可以为猪腹泻 相关疾病防控提供一定技 术支持。 权利要求书1页 说明书9页 序列表3页 附图6页 CN 114807436 A 2022.07.29 CN 114807436 A 1.一组用于检测PEDV、 TGEV和PDCoV中的至少一种的引 物探针组， 其特征在于， 包括第 一引物探针组、 第二引物探针组和第三引物探针组； 所述第一引物探针组为针对PEDV的特异性引物对和探针， 所述特异性引物对PEDV ‑F/R 的序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示， 探针PEDV ‑P的序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述第二引物探针组为针对TGEV的特异性引物对和探针， 所述特异性引物对TGEV ‑F/R 的序列如SEQ  ID NO.4和SEQ  ID NO.5所示， 探针TGEV ‑P的序列如SEQ  ID NO.6所示； 所述第三引物探针组为针对PDCoV的特异性引 物对和探针， 所述特异性引物对PDCoV ‑ F/R的序列如SEQ  ID NO.7和SEQ  ID NO.8所示， 探针P DCoV‑P的序列如SEQ  ID NO.9所示。 2.根据权利要求1所述的引物探针组， 其特征在于， 所述PEDV ‑P、 所述TGEV ‑P和所述 PDCoV‑P的5'端分别连接有不同的荧 光基团； 所述PEDV ‑P、 所述TGEV ‑P和所述P DCoV‑P的3'端分别连接有淬灭基团。 3.一种用于检测PEDV、 TGEV和PDCoV中的至少一种的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要 求1或2所述的引物探针组。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述引物探针组中， PEDV ‑F、 PEDV‑R与 PEDV‑P的工作浓度的摩尔比为5:4 ‑6:1‑3； TGEV‑F、 TGEV‑R与TGEV‑P的工作浓度的摩尔比为 6:5‑7:4‑6； PDCoV‑F、 PDCoV‑R与PDCoV‑P的工作浓度的摩尔比为1:0.5 ‑1.5:0.5‑1.5； PEDV ‑ P、 TGEV‑P与PDCoV‑P的工作浓度的摩尔比为 4:4‑6:1‑3。 5.根据权利要求 4所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述PEDV ‑P的工作浓度为10 0nM。 6.根据权利要求3或4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括阳性标准品和阴 性标准品。 7.根据权利要求6所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒的使用方法如下： (1)提取样品的核酸； (2)采用权利要求6所述的试剂盒对所述核酸进行PCR检测， 反应结束后分析 结果。 8.根据权利 要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 所述步骤(2)中， 所述PCR的反应程序为： 52℃5min； 95℃10s； 95℃5s， 5 0℃‑56℃30s， 35‑45个循环。 9.根据权利要求7所述的试剂盒， 其特征在于， 所述样本包括猪的肠道组织、 肠道内容 物和粪便中的至少一种。 10.权利要求1或2所述的引物探针组在制备检测 PEDV、 TGEV和 PDCoV中的一种或多种的 试剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807436 A 2一组用于 检测PEDV、 TGEV和PD CoV的引物探针组、 试剂盒及其 应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子检测技术领域， 特别涉及一 组用于检测PEDV、 TGEV和PDCoV的引物 探针组、 试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]猪流行性腹泻病毒(Porcine  epidemic  diarrhea  virus， PEDV)、 猪传染性肠胃炎 病毒(Transmissible  gastroenteritis  virus， TGEV)、 猪德尔塔冠状病毒(Porcine   deltacoronavirus， PDCoV)是3种能引起猪腹泻病的病毒病原， 这3种病毒均属于冠状病毒 病， 具有传播速度快、 危害严重的特点。 这3种病毒造成的腹泻病存在着相似的临床症状， 临 床上主要表现为呕吐、 腹泻， 采食量下降， 影响猪群正常生长发育。 临床上难以分辨， 且常常 混合感染， 给病原的诊断造成了 很大的困难。 [0003]目前PEDV、 TGEV和PDCoV的诊断方法主要包括病原体细胞分离、 电镜技术、 普通RT ‑ PCR、 酶联免疫吸附试验、 环介导等温扩增、 基因芯片等， 但这些方法都存在局限性。 因而亟 需建立一种可以同时检测P EDV、 TGEV和PDCoV的方法， 为猪腹泻相关疾病防控提供一定技术 支持。 发明内容 [0004]本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。 为此， 本发明提出一组用 于检测PEDV、 TGEV和PDCoV中的至少一种的引物探针组， 该组引物探针组灵敏性好， 特异性 高， 重复性好， 能够有效用于同时检测PEDV、 TGEV和PDCoV， 为猪腹泻相关疾病防控提供一定 技术支持。 [0005]本发明还提出一种用于检测PEDV、 TGEV和P DCoV中的至少一种的试剂盒。 [0006]本发明还提出上述引物探针组在制备检测PEDV、 TGEV和PDCoV中的一种或多种的 试剂中的应用。 [0007]本发明的第一个方面， 提供一组用于检测PEDV、 TGEV和PDCoV中的至少一种的引物 探针组， 包括第一引物探针组、 第二引物探针组和 第三引物探针组； 所述第一引物探针组为 针对PEDV的特异性引物对和探针， 所述特异性引物对PEDV ‑F/R的序列如SEQ  ID NO.1和SEQ   ID NO.2所示， 探针PEDV ‑P的序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述第二引物探针组为针对TGEV的 特异性引物对和探针， 所述特异性引物对TGEV ‑F/R的序列如SEQ  ID NO.4和SEQ  ID NO.5所 示， 探针TGEV ‑P的序列如SEQ  ID NO.6所示； 所述第三引物探针组为针对PDCoV的特异性引 物对和探针， 所述特异性引物对PDCoV ‑F/R的序列如SEQ  ID NO.7和SEQ  ID NO.8所示， 探针 PDCoV‑P的序列如SEQ  ID NO.9所示。 [0008]在本发明的一些实施 方式中， 所述PEDV ‑P、 所述TGEV ‑P和所述PDCoV ‑P的5'端分别 连接有不同的荧光基团； 所述PEDV ‑P、 所述TGEV ‑P和所述PDCoV ‑P的3'端分别连接有淬灭基 团。说　明　书 1/9 页 3 CN 114807436 A 3