(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210374249.3 (22)申请日 2022.04.11 (71)申请人 中国科学院海洋研究所 地址 266071 山东省青岛市 市南区南海路7 号 (72)发明人 李墨非　孙黎　 (74)专利代理 机构 沈阳科苑专利商标代理有限 公司 210 02 专利代理师 李颖 (51)Int.Cl. A61K 38/16(2006.01) A61P 31/04(2006.01) C07K 14/195(2006.01) C07K 1/22(2006.01) C12N 15/31(2006.01)C12N 15/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种迟缓爱德华氏菌TraT蛋白的应用 (57)摘要 本发明涉及分子生物学领域， 具体的说是一 种迟缓爱德 华氏菌TraT蛋白的应用。 迟缓爱德 华 氏菌(Edwardsiellla  tarda)TraT重组蛋白在制 备抗细菌感染制剂中的应用。 本发明的TraT重组 蛋白能够与小鼠巨噬细胞 Raw264.7细胞结合， 且 能显著抑制迟缓爱德华氏菌黏附小鼠巨噬细胞 Raw264.7细胞的能力。 所得TraT重组蛋白在抗迟 缓爱德华氏菌感 染中具有应用潜能。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 114949176 A 2022.08.30 CN 114949176 A 1.一种迟缓爱德华氏 菌TraT蛋白的应 用， 其特征在于 ： 迟缓爱德华氏 菌 (Edwardsiel lla tarda)TraT重组蛋白在制备抗细菌感染制剂中的应用。 2.按权利 要求1所述的迟缓爱德华氏菌TraT蛋白的应用， 其特征在于： 所述TraT重组蛋 白为序列表SEQ  ID No.1中氨基酸序列所示。 3.按权利要求2所述的应用， 其特征在于： 所述TraT重组蛋白在制备抗迟缓爱德华氏菌 感染细胞制剂的应用。 4.按权利要求1 ‑3任意一项所述的应用， 其特征在于： 其特征在于： 所述TraT重组蛋白 的构建为以迟缓爱德华氏菌cDNA为模板， 用引物F1和R1进行PCR扩增， PCR产物连接表达载 体后得到重组质粒， 将其转化至BL21(DE3)， 获得转化子BL21/pEtTraT， 经异丙基 ‑β‑D‑硫代 半乳糖苷诱导后， 利用亲和层析柱纯化重组蛋白， 即为序列表SEQ  ID No.1所示的TraT重组 蛋白； 所述引物F1和R 1分别为： F1， 5’ ‑GATATCATGAT TAAGAAGCGTAATCTGGAGG‑3’； R1， 5’ ‑GATATCCAGAATGCTGGCGATGGATT‑3’。 5.按权利要求3所述的应用， 其特 征在于： 所述细菌为迟缓爱德华氏菌 。 6.一种构建TraT重组蛋白的引物对， 其特征在于： 构建所述SEQ  ID No.1所示TraT重组 蛋白(pEtTraT)的引物对为所述引物F1和R 1分别为： F1， 5’ ‑GATATCATGAT TAAGAAGCGTAATCTGGAGG‑3’； R1， 5’ ‑GATATCCAGAATGCTGGCGATGGATT‑3’。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114949176 A 2一种迟缓爱德华氏菌Tr aT蛋白的应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学 领域， 具体的说是一种迟缓爱德华氏菌TraT蛋白的应用。 背景技术 [0002]迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella  tarda)是一种重要的海洋动物病原菌， 在世界海 水养殖业中造成重大的经济损失。 此外,还能引发两栖类、 爬行类甚至哺乳类动物患病。 迟 缓爱德华氏菌具有黏附和入侵哺乳动物上皮细胞和巨噬细胞的能力， 同时能够抵抗宿主胞 内杀伤并在其中增殖， 进而破坏宿主免疫系统而引发全身出血性败血症。 已知迟缓爱德华 氏菌能够利用自身毒力因子黏附和侵入宿主细胞， 并实现胞内复制。 TraT蛋白是一种外膜 毒力蛋白， 在与外界环境进行物质交换和细菌融合中发挥重要的作用， 同时能够帮助大肠 杆菌抵抗血清的杀伤作用。 但是对于迟缓爱德华氏菌TraT蛋白的功能及应用价值尚不十 分 清楚。 发明内容 [0003]本发明目的在于提供一种迟缓爱德华氏菌TraT蛋白的应用。 [0004]为实现上述目的， 本发明采用的技 术方案为： [0005]一种迟缓爱德华氏菌TraT蛋白的应用， TraT重组蛋白在制备抗细 菌感染制剂中的 应用。 [0006]所述TraT重组蛋白为序列表SEQ  ID No.1中氨基酸序列所示。 [0007]所述TraT重组蛋白在制备抗迟缓爱德华氏菌感染细胞制剂的应用。 [0008]所述迟缓爱德华氏菌TraT重组蛋白在制备小鼠巨噬细胞Raw264.7细胞系的抗细 菌感染制剂中的应用。 [0009]所述迟缓爱德华氏菌TraT重组蛋白的构建为以迟缓爱德华氏菌cDNA为模板， 用引 物F1和R1进行PCR扩增， PCR产物连接表达载体后 得到重组质粒， 将其转化至BL21(DE3)， 获 得转化子BL21/pEtTraT， 经异丙基 ‑β‑D‑硫代半乳糖苷诱导后， 利用亲和层析柱纯化重组蛋 白， 即为序列表SEQ  ID No.1所示的迟缓爱德华氏菌TraT重组蛋白； [0010]所述引物F1和R 1分别为： [0011]F1， 5’ ‑GATATCATGAT TAAGAAGCGTAATCTGGAGG‑3’； [0012]R1， 5’ ‑GATATCCAGAATGCTGGCGATGGATT‑3’。 [0013]进一步的说： [0014]1)表达载体pEtTraT的构建 [0015]以迟缓爱德华氏菌cDNA为模板， 用引物F1和R1进行PCR扩增， PCR产物纯化后与质 粒T‑Simple进行连接， 连接混合液转化大肠杆菌后在含卡那霉素的LB培养基上培养8 ‑12h， 筛选转化子提取质粒， 得重组质粒； 将重组质粒用EcoRV酶切， 回收目的片段， 连接于 pET259， 连接液转化入大肠杆菌， 在含卡那霉素的LB培养基上培养18 ‑24小时， 筛选转化子 提取质粒， 即为表达载体pEtTraT；说　明　书 1/4 页 3 CN 114949176 A 3