(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210376270.7 (22)申请日 2022.04.11 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114854733 A (43)申请公布日 2022.08.05 (73)专利权人 广东省农业科 学院动物科 学研究 所 地址 510640 广东省广州市天河区五山 镇 大丰一街1号 (72)发明人 黄敏伟　彭凯　陈晓瑛　鲁慧杰　 李朝政　黄文　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 陈洁娣　刘明星 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)(56)对比文件 CN 101942437 A,201 1.01.12 CN 10214646 0 A,2011.08.10 CN 107881246 A,2018.04.0 6 WO 2017215 055 A1,2017.12.21 李朝政等.凡纳滨 对虾“海兴农2号 ”良种选 育和健康养殖产业 化. 《科技成果》 .2020,第1- 5 页. 李强勇等.凡纳滨 对虾微卫星分子标记的开 发及不同养殖家系遗传多态性分析. 《南方农业 学报》 .2020,第51卷(第2期),第42 9-436页. 王艳红等.凡纳滨 对虾EST微 卫星标记初步 筛选. 《水产学报》 .201 1,第35卷(第07期),第 969-976页. Jianbo Yuan 等.Simple sequence repeats drive gen ome plasticity and promote adaptive evo lution in penaeid shrimp. 《Communications biology》 .2021,第4卷(第1 期),第1-14页. 审查员 周惠 (54)发明名称 一种用于构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的微 卫星标记引物组合以及应用和方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于构建 凡纳滨对虾DNA 指纹图谱的微卫星标记引物组合 以及应用和方 法。 本发明基于凡纳滨对虾基因组数据开发筛选 出具有多态性的13个微卫星标记引物对， 该13个 微卫星标记引物对可用于构建凡纳滨对虾DNA指 纹图谱， 并结合毛细管电泳技术构建得到的凡纳 滨对虾DNA指纹图谱， 具有电泳分辨率高、 灵敏度 高、 数据分析处理便捷等特点， 为DNA指纹图谱的 在凡纳滨对虾上的进一步应用研究提供了坚实 的理论支持。 权利要求书1页 说明书8页 序列表5页 附图4页 CN 114854733 B 2022.10.28 CN 114854733 B 1.一种用于构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的微卫星标记引物组合， 其特征在于， 所述引 物组合包括第1 ‑13引物对， 所述第1 ‑13引物对的碱基序列分别如SEQ  ID NO.1‑26所示。 2.根据权利要求1所述的用于构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的微卫星标记引物组合， 其 特征在于， 所述第1 ‑13引物对中每 个引物对的上游引物的5'端标记有荧 光基团。 3.根据权利要求2所述的用于构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的微卫星标记引物组合， 其 特征在于， 所述 荧光基团为选自FAM、 TAMRA和H EX中的任意 一种。 4.权利要求1 ‑3中任一项所述的用于构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的微卫星标记引物 组合在构建凡纳滨 对虾DNA指纹图谱中的应用。 5.一种构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 用权利要求 1‑3中任一项所述的微卫星标记引物组合的第1 ‑13引物对分别对多个凡纳滨对虾群体的 DNA进行PCR扩增， 得到扩增产物； 将所述扩增产物分别进行电泳， 得到扩增带型数； 将所述 扩增带型数进行编码处理， 得到每一种所述凡纳滨对虾群体的DNA对应所述第1 ‑13引物对 的第1‑13带型编号， 串联 所述第1‑13带型编号形成字符串。 6.根据权利要求5所述的构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的方法， 其特征在于， 所述编码 处理是指： 统计所述第1 ‑13引物对中每对引物对对应的所述扩增带型数， 以 “1”和“0”分别 代表某个等位基因位点扩增出 的DNA条带的有和无， 按照 从上到下即由小片段向大片段的 读带方向， 将其 转换为由“1”和“0”组成的带 型编号。 7. 根据权利要求5所述的构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱 的方法， 其特征在于， 所述PCR 扩增的程序为： 96℃预变性3  min； 96℃变性30  s， 60℃退火30  s， 72℃延伸1  min， 30个循 环； 72℃再延伸10  min。 8.由权利要求5 ‑7任一项所述的凡纳滨对虾DNA指纹图谱构建方法构建得到的凡纳滨 对虾DNA指纹图谱在鉴定凡纳滨 对虾种质资源中的应用。 9.一种用于凡纳滨对虾种质资源鉴定的试剂 盒， 其特征在于， 含有权利要求1所述的微 卫星标记引物组合。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854733 B 2一种用于构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的微卫星标记引物组 合以及应用和方 法 技术领域 [0001]本发明属于D NA指纹图谱技术领域， 具体涉及一种用于构建凡纳滨对虾D NA指纹图 谱的微卫星标记引物组合以及应用和方法。 背景技术 [0002]凡纳滨对虾(Litopenaeus  vannamei)， 俗称南美白对虾， 是世界养殖量最大的对 虾品种。 其中， 2020年我国凡纳滨对虾养殖年产量超 过180万吨， 占对虾养殖产量90％以上， 已然成为我国水产养殖支柱产业之一。 近年来， 随着凡纳滨对虾育种技术方法不断进步， 越 来越多凡纳滨对虾品种不断涌现出来。 然而， 目前并没有对这些凡纳滨对虾种质资源进行 有效的鉴定和分类。 因此开 发有效的鉴定方法， 对凡纳 滨对虾种质资源的研究、 品种创新尤 为重要。 [0003]DNA指纹图谱是指D NA样品用特定分子标记技术 处理显示出具有特定D NA片段的总 称。 随着生物技术的进步与发展， DNA指纹图谱技术在品种资源多样性和品种鉴定研究中得 到广泛的应用。 其中， 用于构建DNA指纹图谱的微卫星分子标记不仅具有数量丰富、 广泛分 布于基因 组中， 而且具有可重复性高、 操作简单、 省时省力等优点。 [0004]目前， DNA指纹图谱技术在凡纳滨对虾上的应用并不多， 以微卫星 分子标记来构建 凡纳滨对虾DNA指纹图谱的更 是未见报道。 发明内容 [0005]本发明旨在提供一种用于构建凡纳滨对虾D NA指纹图谱的微卫星标记引物组合及 其应用， 即筛选获得稳定扩增且具有多态性的微卫星分子标记， 并应用于凡纳滨对虾DNA指 纹图谱构建。 [0006]本发明首先提供一种用于构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的微卫星标记引物组合， 所述的引物组合包括第1 ‑13引物对， 所述第1 ‑13引物对的碱基序列分别如SEQ  ID NO.1‑26 所示。 [0007]所述第1‑13引物对中每个引物对的上游引物的5'端标记有荧光基团， 所述荧光基 团为选自FAM、 TAMRA和H EX中的任意 一种。 [0008]本发明的另一目的在于提供上述微卫星标记引物组合在构建凡纳滨对虾DNA指纹 图谱中的应用。 [0009]本发明的另一目的在于提供一种构建凡纳滨对虾DNA指纹图谱的方法， 该方法所 构建出的凡纳 滨对虾DNA指纹图谱能够准确反应出凡纳滨对虾DNA指纹图谱的信息。 包括以 下步骤： 用上述的微卫星标记引物组合的第1 ‑13引物对分别对多个凡纳滨对虾群体的DNA 进行PCR扩增， 得到扩增产 物； 将所述扩增产物分别进 行电泳， 得到扩增带型数； 将所述扩增 带型数进行编码处理， 得到每一种所述凡纳滨对虾群体的DNA对应所述第1 ‑13引物对的第 1‑13带型编号， 串联 所述第1‑13带型编号形成字符串。说　明　书 1/8 页 3 CN 114854733 B 3