(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210381377.0 (22)申请日 2022.04.12 (71)申请人 广东海洋大学 地址 524088 广东省湛江市麻章区海大路1 号 申请人 广西壮族自治区水产引育种中心 (72)发明人 田昌绪　沈奕君　林星桦　周大颜　 潘炎杨　郑显龙　李广丽　朱春华　 廖愚　肖珊　 (74)专利代理 机构 广州知友专利商标代理有限 公司 44104 专利代理师 宣国华　刘艳丽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01)C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及其 应用 (57)摘要 本发明公开了一种胡子鲇性别特异性分子 标记引物， 该引物为引物NP544， 引 物NP544包括 正向引物NP544 ‑F和反向引物NP544 ‑R， 碱基序列 分别如SEQ  ID NO： 1所示和SEQ  ID NO： 2所示。 还 公开了用于胡子鲇性别鉴定的试剂盒和方法， 及 上述引物或试剂盒和方法在鉴定胡子鲇性别方 面的应用。 该引物特异性好， 准确性高， 对胡子鲇 活体没有伤害， 可一次性快速准确批量鉴定胡子 鲇的性别， 具有重要的科研和应用价 值。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图1页 CN 114657264 A 2022.06.24 CN 114657264 A 1.一种胡子鲇性别特异性分子标记引物， 其特征是： 所述引物为引物NP544， 所述引物 NP544包括正向引物NP544 ‑F和反向引物NP544 ‑R， 所述正向引物NP544 ‑F的碱基序列如SEQ   ID NO： 1所示， 所述反向引物NP54 4‑R的碱基序列如SEQ  ID NO： 2所示。 2.一种用于胡子鲇性别鉴定的试剂盒， 其特征是： 所述试剂盒包括权利要求1中的引 物。 3.一种胡子鲇性别鉴定方法， 其特征是： 在雌雄个体的基因组DNA中采用PCR扩增出特 异性片段， 具体包括： 合成权利要求1中的引物， 提取待测胡子鲇的基因组DNA， 采用权利要 求1中的引物， 以基因组DNA为模板， 进行PCR扩增， 采用毛细管电泳 法检测扩增产物， 根据测 序峰型结果鉴定雌雄个 体， 其中杂合峰型为 雄性个体， 纯合峰型为雌性个 体。 4.根据权利 要求3所述的胡子鲇性别鉴定方法， 其特征是： PCR扩增时采用的PCR反应体 系为： 30ng/ μL  DNA模板1.0 μL， 2 ×Taq MasterMix 12.5 μL， 10mM正向引物NP544 ‑F和反向引 物NP544‑R各0.5 μL， d dH2O 10.5 μL， 总共25 μL。 5.根据权利 要求3所述的胡子鲇性别鉴定方法， 其特征是： PCR扩增时采用的PCR反应程 序为： 94℃预变性5min， 94℃变性30sec， 58℃退火30sec， 72℃延伸30sec， 循环35次， 72℃延 伸10min。 6.权利要求1所述的引物或权利要求2所述的试剂盒或权利要求3 ‑5任一项所述的方法 在胡子鲇性别鉴定方面的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114657264 A 2一种胡子鲇性别特异性分子标记引物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于胡子鲇性别鉴定技术， 具体涉及一种胡子鲇性别特异性分子标记引物 及其应用。 背景技术 [0002]胡子鲇(Clariasfuscus)， 又称塘虱鱼， 隶属鲇形目、 胡子鲇科、 胡子鲇属。 该物种 肉质细嫩， 味道鲜美， 经济价值高， 是我国南方大面积养殖的淡水鱼类。 胡子鲇具有特殊的 附属呼吸器官， 可适应极低溶氧环 境， 为广温性鲇科鱼类， 具有抗病能力强、 养殖简单、 周期 短、 产量高、 成本低和容易运输等特点， 目前在广西、 广东和福建等地形成规模化养殖产业， 成为具有较好 发展前途的淡水养殖品种。 胡子鲇属雄性异配XX/XY性别决定类型， 具有明显 的雌雄生长差异， 在同等养殖条件下， 雄鱼生长速度远远高于同龄 雌鱼。 当养殖胡子鲇达到 上市规格时， 雌性胡子鲇正处于性腺发育阶段， 腹部膨大， 其性腺指数远高于雄性， 导致雌 鱼比同等规格的雄鱼价格低4元/公斤左右。 因此， 进行全雄胡子鲇品种研究可以大大节约 养殖成本、 提高商品鱼质量和经济效益。 然而， 胡子鲇雌雄个体在胚胎和幼鱼阶段无法通过 形态学鉴定性别， 这给开展胡子鲇性腺分化研究和单性苗种培育带来很大 的困难， 也极大 地限制了该物种产业的发展。 迄今为止， 国内外尚无能够成功鉴定胡子鲇遗传性别的分子 标记的报道。 因此， 开发一种准确 鉴定遗传性别的分子标记在胡子鲇单性育种中具有极大 的生产应用价 值。 发明内容 [0003]本发明的目的在于提供一种胡子鲇性别特异性分子标记引 物及包括该引物的试 剂盒。 [0004]本发明第二个目的在于提供一种胡子鲇性别鉴定方法。 [0005]本发明的最后一个目的在于提供上述引物或上述试剂盒或上述方法在胡子鲇性 别鉴定方面的应用。 [0006]本发明的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现： 一种胡子鲇性别特异性 分子标记引物， 所述引物为引物NP544， 所述引物NP544包括正向引物NP544 ‑F和反向引物 NP544‑R， 所述正向引物NP544 ‑F的碱基序列如SEQ  ID NO： 1所示， 所述反 向引物NP544 ‑R的 碱基序列如SEQ  ID NO： 2所示。 [0007]具体的， 引物NP54 4的核苷酸序列如下： [0008]正向引物NP54 4‑F： 5’ ‑cacacata agctggataaacggagaca‑3’； [0009]反向引物NP54 4‑R： 5’ ‑ttaaacccaagcccttgccaacaa‑3’。 [0010]本发明还提供了一种用于胡子鲇性别鉴定的试剂盒， 该试剂盒包括上述胡子鲇特 异性分子标记引物。 [0011]本发明的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现： 一种胡子鲇性别鉴定方 法， 包括以下步骤： 在雌雄个体的基因组DNA中采用PCR扩增出特异性片段， 具体包括： 合成说　明　书 1/4 页 3 CN 114657264 A 3